No Se
Páginas: 2 (328 palabras)
Publicado: 12 de junio de 2012
NOMBRE : Diego Guerrero
CURSO : Biotecnología Industrial
Profesor : Sergio Asencio
Fecha Entrega : 10-06-2012
Materiales y Pasos:
TAMPON DE EXTRACCION
ELEMENTOS | CONCENTRACION | PH |CAN. ML | GRAMOS | FUNCION |
Nacl | 5M | - | 20 | 5.85 | Precipita proteínas |
Tris HCl | 1M | PH 8 | 20 | 2.42 | Mantiene el PH |
EDTA | 0.25M | - | 40 | 3.72 | Atrapa iones de Mg |
SDS| 20% | - | 12.5 | 2.5 | Detergente. Elimina grasas |
Material vegetal (pasto): Protocolo de extracción y procedimiento 1. Adicionar y triturar el material vegetal. La finalidad de latrituración o maceración del material a extraer ADN siendo la primera destrucción física de la muestra a aislar ADN. Por lo que ahora básicamente se obtiene una solución muy diluida de lo molido sedebe mezclar hasta que lo molido quede homogéneo
Se usara un componente llamado Bisulfito de Sodio (sirve como conservante)+ el tampón de extracción
Luego la mezcla se incubara en baño maríaa una temperatura de 65ºC por un tiempo de 20 Minutos. (Este fue medido por un termómetro aparte NO de la maquina)
Para luego a unos 4 o 5 Ml de mezcla agregarle Cloroformo Alcoholisoamil enuna proporción de 24:1 HASTA LOS 12 del TUBO
Luego se debe llevar a un frasco de centrifuga para ser colocados en esta y se le darán 2800 revoluciones por minuto (RPM) por alrededor de 15minutos.
Se extraerá el sobrenadante del tubo (que es lo que queda encima del tubo de centrifuga) con una pipeta Pasteur.
“observación” material extraído salió de color VERDE (no se quemo)Luego suspender con alcohol frio 95% a -20ºC (dejarlo unos 60 minutos en el refrigerador para alcanzar la temperatura) se preparan 9.5 Ml de alcohol y 0.5 Ml de agua
Luego se debe tapar con papelde aluminio y guardar en refrigerador a -20ºC
Luego de esta etapa se deberán ver dos fases en el tubo una fase clara y una más oscura el ADN se debe observar en la parte superior del frasco
CURSO : Biotecnología Industrial
Profesor : Sergio Asencio
Fecha Entrega : 10-06-2012
Materiales y Pasos:
TAMPON DE EXTRACCION
ELEMENTOS | CONCENTRACION | PH |CAN. ML | GRAMOS | FUNCION |
Nacl | 5M | - | 20 | 5.85 | Precipita proteínas |
Tris HCl | 1M | PH 8 | 20 | 2.42 | Mantiene el PH |
EDTA | 0.25M | - | 40 | 3.72 | Atrapa iones de Mg |
SDS| 20% | - | 12.5 | 2.5 | Detergente. Elimina grasas |
Material vegetal (pasto): Protocolo de extracción y procedimiento 1. Adicionar y triturar el material vegetal. La finalidad de latrituración o maceración del material a extraer ADN siendo la primera destrucción física de la muestra a aislar ADN. Por lo que ahora básicamente se obtiene una solución muy diluida de lo molido sedebe mezclar hasta que lo molido quede homogéneo
Se usara un componente llamado Bisulfito de Sodio (sirve como conservante)+ el tampón de extracción
Luego la mezcla se incubara en baño maríaa una temperatura de 65ºC por un tiempo de 20 Minutos. (Este fue medido por un termómetro aparte NO de la maquina)
Para luego a unos 4 o 5 Ml de mezcla agregarle Cloroformo Alcoholisoamil enuna proporción de 24:1 HASTA LOS 12 del TUBO
Luego se debe llevar a un frasco de centrifuga para ser colocados en esta y se le darán 2800 revoluciones por minuto (RPM) por alrededor de 15minutos.
Se extraerá el sobrenadante del tubo (que es lo que queda encima del tubo de centrifuga) con una pipeta Pasteur.
“observación” material extraído salió de color VERDE (no se quemo)Luego suspender con alcohol frio 95% a -20ºC (dejarlo unos 60 minutos en el refrigerador para alcanzar la temperatura) se preparan 9.5 Ml de alcohol y 0.5 Ml de agua
Luego se debe tapar con papelde aluminio y guardar en refrigerador a -20ºC
Luego de esta etapa se deberán ver dos fases en el tubo una fase clara y una más oscura el ADN se debe observar en la parte superior del frasco
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