norther-western-southern
Páginas: 3 (572 palabras)
Publicado: 30 de marzo de 2013
Northern Blot
Es una técnica muy similar al Southern Blot que permite la identificación de secuencias específicas de RNA.
La muestra de RNA a analizar no requiere fragmentación y se somete aelectroforesis en geles de agarosa, donde las moléculas de RNA se separan desde mayor a menor tamaño.
Una vez terminada la electroforesis, y sin teñir el gel, los fragmentos se traspasan a unfiltro de nitrocelulosa ó a una membrana nylon, luego el filtro se incuba con una sonda marcada, específica para la secuencia que se desea identificar.
Esta sonda es una secuencia de ácido nucleico,por ejemplo cDNA, que reconocerá a la secuencia de RNA inmovilizada en el filtro, a través del reconocimiento de secuencias complementarias de ácidos nucleicos.
El nombre de la técnica deriva poranalogía al Southern Blot.
Thomas, P.S. 1980. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:5201-5205
(tomado de: http://ejb.ucv.cl/gmunoz/genweb/genetica/frame/textos/3_3northern.htm)
Western Blot.Para llevar a cabo un Western blot, una muestra de proteínas desnaturalizadas con SDS se someten a una electroforesis en gel (PAGE). Al cabo de la corrida obtendremos un patrón de bandas que dependerádel número de proteínas presentes en la muestra y de su tamaño. Para proceder a su transferencia a una membrana de nitrocelulosa, vamos a poner en íntimo contacto el gel con una membrana denitrocelulosa o PVC y los colocaremos en un aparato para que se produzca una electrotransferencia de las bandas de proteína del gel a la membrana. En ese proceso se logra una transferencia cuantitativa,manteniendo además el mismo patrón del gel. Una vez completada esta operación las bandas se revelan por el agregado de un anticuerpo específico.
De esta forma se visualizarán las bandas de proteínas y sepodrá calcular la concentración de cada una en la muestra original. Recuerden que el uso de anticuerpos le otorga a la reacción una especificidad que de otro modo no tiene. Por otra parte, los...
Es una técnica muy similar al Southern Blot que permite la identificación de secuencias específicas de RNA.
La muestra de RNA a analizar no requiere fragmentación y se somete aelectroforesis en geles de agarosa, donde las moléculas de RNA se separan desde mayor a menor tamaño.
Una vez terminada la electroforesis, y sin teñir el gel, los fragmentos se traspasan a unfiltro de nitrocelulosa ó a una membrana nylon, luego el filtro se incuba con una sonda marcada, específica para la secuencia que se desea identificar.
Esta sonda es una secuencia de ácido nucleico,por ejemplo cDNA, que reconocerá a la secuencia de RNA inmovilizada en el filtro, a través del reconocimiento de secuencias complementarias de ácidos nucleicos.
El nombre de la técnica deriva poranalogía al Southern Blot.
Thomas, P.S. 1980. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:5201-5205
(tomado de: http://ejb.ucv.cl/gmunoz/genweb/genetica/frame/textos/3_3northern.htm)
Western Blot.Para llevar a cabo un Western blot, una muestra de proteínas desnaturalizadas con SDS se someten a una electroforesis en gel (PAGE). Al cabo de la corrida obtendremos un patrón de bandas que dependerádel número de proteínas presentes en la muestra y de su tamaño. Para proceder a su transferencia a una membrana de nitrocelulosa, vamos a poner en íntimo contacto el gel con una membrana denitrocelulosa o PVC y los colocaremos en un aparato para que se produzca una electrotransferencia de las bandas de proteína del gel a la membrana. En ese proceso se logra una transferencia cuantitativa,manteniendo además el mismo patrón del gel. Una vez completada esta operación las bandas se revelan por el agregado de un anticuerpo específico.
De esta forma se visualizarán las bandas de proteínas y sepodrá calcular la concentración de cada una en la muestra original. Recuerden que el uso de anticuerpos le otorga a la reacción una especificidad que de otro modo no tiene. Por otra parte, los...
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