Northerblot

INDICE
INTRODUCCIÓN
1. NOTHERNBLOT …………………………………………………………………………………………. 2
. INTRODUCCIÓN ………………………………………………………………………………………… 3
. DEFINICIÓN ………………………………………………………………………………………… 4
. PROCEDIMIENTO ………………………………………………………………………………………… 5
. APLICACIONES............................................................................................ 11
. VENTAJAS ………………………………………………………………………………………… 11
. DESVENTAJAS ………………………………………………………………………………………… 11
. CONCLUSIÓN ………………………………………………………………………………………… 12
2. WESTERN BLOT ……………………………………………………………………………………….. 13
. INTRODUUCCIÓN ………………………………………………………………………………………… 14
. DEFINICIÓN……………………………………………………………………………………….. 15
. APLICACIONES ……………………………………………………………………………………….. 16
. VENTAJAS ……………………………………………………………………………………….. 16
. DESVENTAJAS ……………………………………………………………………………………….. 16
. PROCEDIMIENTO ………………………………………………………………………………………..
. CONCLUSIÓN ………………………………………………………………………………………..

INTRODUCCÓN

El ARN es el ácidonucleico más abundante en la célula. Una célula típica contiene 10 veces más ARN que ADN. El azúcar presente en el ARN es la ribosa, que posee un grupo hidroxilo (OH) libre en la posición 2'. Este grupo participa en la formación de un intermediario en el mecanismo de hidrólisis y determina que el ARN sea químicamente inestable, y se hidrolice fácilmente en una solución acuosa alcalina. Tambiénposee un acido fosfórico que le proporciona la carga negativa. En la mayor parte de los casos, el ARN es un polímero monocatenario, pero las secuencias nucleotídicas de estas moléculas poseen, en mayor o menor medida, regiones complementarias que determinan tramos de apareamientos intracatenarios (estructura secundaria en forma de ARN doble). Las ARNasa utilizan el mismo mecanismo que se observa enla catálisis alcalina, pero la mayoría de estas enzimas atacan exclusiva- o preferentemente la ARN monocatenario. Para poder medir el tamaño del ARN en especial el ARNm y realizar en general un estudio del ARN se utiliza un método llamado northernblot.
El análisis del Norte a pesar de su edad en el mundo de alta tecnología de PCR en tiempo real, ensayos de nucleasa de protección (RPA) ymicroarrays, sigue siendo el estándar de oro para la detección y cuantificación de los niveles de ARNm. Esto es porque el norte de blot permite una comparación directa de la abundancia de ARN mensajero entre las muestras en una sola membrana.
En el norte de mancha la principal diferencia entre las otras técnicas secante es que el ARN es el factor de ser detectado. Además, debido al hecho de que el ARN esnormalmente una sola cadena, crea complejas estructuras secundarias que afectan a su migración y por lo tanto, las condiciones de desnaturalización se utiliza para ejecutar los geles (a diferencia del Sur).

DEFINICIÓN:
Northern blot es una técnica de detección de moléculas de ácido ribonucleico (ARN) de una secuencia dada dentro de una mezcla compleja (por ejemplo, un ARN mensajero para unpéptido dado en una extracción de ARN total).Para ello, se toma la mezcla de ARN y se somete a una electroforesis en gel a fin de separar los fragmentos en base a su tamaño. Tras esto, se transfiere el contenido del gel, ya resuelto, a una membrana cargada positivamente en la cual se efectúa la hibridación de una sonda molecular marcada radiactiva o químicamente.1
El nombre de la técnica deriva dela propia de la detección de ácido desoxirribonucleico (ADN), denominada Southern blot en honor a su descubridor; de este modo, al desarrollarse la técnica equivalente para ARN se empleo el punto cardinal opuesto («northern», septentrional en inglés, frente al meridional «southern»). El northern blot fue desarrollado en 1977 por James Alwine, David Kemp y George Stark en la...