Nuevo Método Para Genotipado Abo

Jesús Cámara Almirón.
4º de Biología.
Genética Evolutiva.

Nuevo método para genotipado
ABO utilizando una multiplex
para detectar SNPs y su
aplicación a casos forenses

Introducción
Los grupos sanguíneos ABO se han usado desde siempre para la identificación personal y test
de paternidad con distinta finalidad en medicina, medicina forense, investigación criminal…etc.
El éxito deestos marcadores en la identificación, se debe principalmente a que los grupos ABO
de la sangre se encuentran ampliamente distribuidos por todos los órganos y fluidos corporales,
por lo que es muy fácil obtener una muestra que presente dichos marcadores.
No obstante, en los últimos años no han estado disponibles comercialmente anticuerpos
policlonales para los antígenos ABO, lo que daba lugar aerrores al determinar a los
especímenes por técnicas serológicas convencionales. El análisis del gen ABO en muestras de
DNA también resulta muy complicado mediante las técnicas convencionales, ya que en
determinados casos forenses, el DNA está tan deteriorado que es imposible estudiar dicho gen.
Por todo esto, y para disponer de más recursos, resulta necesario idear nuevas técnicas que
puedanaplicarse a las ciencias médicas y forenses a la hora de llevar a cabo la identificación
personal. En este trabajo, se expone una nueva forma de llevar a cabo el genotipado ABO
mediante la detección de 6 SNPs gracias una reacción de PCR múltiple.
Estructura del gen ABO
Este gen se encuentra en el brazo largo del cromosoma 9 y contiene 7 exones de los cuales los
dos últimos son los que tienenmayor importancia. Este gen codifica unas glicosiltransferasas (glicosiltransferasa A en el caso
del grupo A y glicosiltransferasa B en el caso del grupo B) específicas que se encargan de
transferir un monosacárido inmunocompetente a la cadena oligosacarídica (antígeno H) que se
encuentra en la superficie de los eritrocitos tipo O. Esto va a originar la estructura típica de los
antígenos Ay B. Los grupos A y B difieren en que la enzima codificada por el gen transfiere un
monosacárido distinto a la cadena. Este monosacárido es en el grupo A N-acetil-Dgalactosamina y en el grupo B es D-galactosa. Los individuos del grupo O presentan una

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deleción en el exón 6 que originan una glicosiltransferasa inactiva y por tanto, deja intacta la
estructura original del antígeno H.
Losproductos de los dos alelos A y B del gen ABO (los dos tipos de glicosiltransferasas)
difieren debido a una sustitución en 4 aminoácidos: Arg176 por gly, gly235 por Ser, leu266 por
Met y Gly268 por ala. Los aminoácidos en las posiciones 266 y 268 son los más importantes a
la hora de determinar la actividad enzimática, lo que va a determinar que el producto génico sea
una glicosiltransferasa A(N-acetilgalactosaminiltransferasa) o glicotransferasa B
(galactosiltransferasa). La secuencia codificante del alelo O sería idéntica a la secuencia
codificante del alelo A, con la diferencia de la deleción de un único nucleótido en el exón 6 que
va a provocar un cambio en el marco de lectura generando un codón STOP. Este alelo generaría
una enzima carente de sitio activo que por tanto, nosería funcional.
Existen además de estos alelos principales del sistema ABO, algunos subtipos dentro de cada
tipo de alelo. Existen subgrupos del alelo O (O1v, O2…) que se caracterizan por algunas
variaciones en la secuencia. También se han descrito distintos subtipos dentro de los alelos A
(A1, A2, A3…) y B (B1, B3, Bx…) caracterizados por expresar glicosiltransferasas más o menos
eficaces (demayor a menos eficacia), de forma que unos subgrupos sanguíneos presentarán una
mayor cantidad de antígenos en la membrana de los eritrocitos que otros, por lo que tendrán una
mayor reactividad frente a los anticuerpos correspondientes.
Material y métodos
Las muestras de sangre fueron fenotipadas mediante métodos serológicos (el método normal
empleado es el de determinación cruzada1). Estas...