Numeracion de microorganismos

PRÁCTICA Nº 3
NUMERACION DE MICROORGANISMOS POR METODOS INDIRECTOS
(METODO DE MICROORGANISMOS VIABLES)

I. INTRODUCCIÓN:
La leche es un excelente medio de cultivo para el crecimiento microbiano, gracias a su elevada actividad de agua, su pH (6.4 – 6.6) y su abundante cantidad y calidad de nutrientes. Esto exige unas rigurosas normas de higiene tanto en su producción como en sutratamiento.
La leche aunque proceda de vacas sanas y se haya obtenido en las mejores condiciones higiénicas, siempre está contaminada con microorganismos en mayor o menor grado. Los microorganismos que se encuentran en la leche tienen tres orígenes: el interior de la ubre, el exterior de los pezones y sus alrededores próximos, y el ordeño y los utensilios que se utilizan normalmente para manipular laleche.
Normalmente, se trata de gérmenes saprofíticos del pezón y de los canales galactóforos, como micrococos, estreptococos lácticos y lactobacilos. En caso de enfermedad del animal, se pueden presentar otros microorganismos patógenos y peligrosos desde el punto de vista sanitario, por ejemplo, los agentes de la mastitis tales como: Staphylococcus aureus, Streptococcus agalactiae, Escherichia coli,Corinebacterium bovis, etc.
Por otra parte, entre los microorganismos patógenos para el ser humano procedentes de animales se encuentran Mycobacterium bovis, M. Tuberculosis, Brucella abortus, etc.
El análisis microbiológico de la leche proporciona datos muy útiles que reflejan las condiciones en las que se han obtenido y conservado. Los recuantos bacterianos elevados no inician necesariamenteque la leche contenga bacterias patógenas, peri revelan intensa contaminación o temperaturas de conservación defectuosas.
El desarrollo de métodos rápidos y/o automatizados en el diagnostico de la calidad higiénico sanitaria de la leche y sus productos constituye en los últimos años una necesidad enfocada en lo fundamental en la obtención de la respuesta en el menor tiempo posible para tomar lasmedidas correctivas sobre las posibles brechas en la higiene de algunas de las fases de la cadena productiva antes de que el producto sea liberado en el mercado.
Estos métodos rápidos de diagnóstico bacteriológico en leche se han clasificado atendiendo a diferentes puntos de vistas, no obstante, en lo fundamental han tomado como base los aspectos siguientes: Rapidez con que se obtienen lasrespuestas, la actividad metabólica de los microorganismos, posibilidades de automatización y principios de medición en que se basan las lecturas.
Teniendo en cuenta la diversidad de estas clasificaciones y para una mayor inclusión de métodos rápidos empleados en el diagnóstico microbiológico de la leche, están agrupados en tres grupos: métodos directos, indirectos y en métodos para diagnóstico demicroorganismos específicos.
El método usado en esta práctica es un método indirecto, el método de reducción de colorantes (Reductasa), usando azul de metileno.

Azul de metileno

Los tests de reducción de colorantes se han utilizado durante muchos años como indicadores de la calidad microbiológica de la leche y otros productos alimenticios. Están basados en la medición de la actividad metabólicade las bacterias, ya que muchas de ellas poseen las enzimas deshidrogenasas, las cuales transfieren hidrógeno de un sustrato a un aceptor biológico reduciéndolo. Tal es el uso de la Prueba de Reducción del Azul de Metileno, de la Resazurina y del Trifenilfetrazolium, no obstante, a partir de los años 60 la introducción masiva de la refrigeración trajo consigo la predominancia en la microflora dela leche de los gérmenes psicrófilos, los cuales tienen poco poder reductor, limitando con ello la utilidad de la prueba de reducción (ya que se realiza a 37 ºC).
En el procedimiento se utilizan patrones de azul de metileno o resazurina y se observa el proceso de reducción del colorante (de azul a blanco para el azul de metileno; de azul apizarrado a rosa o blanco para la resazurina). El tiempo...