Nutricion humana

MARCO TEORICO

AISLAMIENTO DE ADN Y TECNICA DE PCR

El ADN se encuentra en el núcleo de las células eucarióticas donde aparece unido a proteínas formando la cromatina. Es la molécula portadora de la información genética, donde se encuentra la clave de los caracteres hereditarios que se traspasan de la célula madre a las células hojas y en definitiva de padres a hijos.
Cada persona tiene supropia información genética, heredada del padre y de la madre. Y por tanto, el ADN de cada persona es único y constituye sus señas moleculares de identidad. Sin embargo, la estructura de la molécula del ADN es igual en todos los seres vivos y consta de una doble cadena de nucleótidos de A (Adenina), T (Timina), C (Citosina) y G (Guanina) enrollados en hélice.

Técnicas de la biotecnología
Losmétodos modernos de la biotecnología dependen del aislamiento y la subsiguiente manipulación del ADN. Un punto muy útil para iniciar a los estudiantes en los conceptos de la biotecnología (una vez que ellos estén familiarizados con el ADN y con su papel en la genética) es el aislamiento del ADN.

Aislamiento del ADN
Todos los estudios moleculares requieren aislar el acido nucleico. Una vezhecho esto, a menudo es necesario saber la cantidad de acido nucleico.

Especímenes
El acido nucleico puede obtenerse a partir de homogenizados de tejidos o a partir de células sanguíneas. Los especímenes de tejidos sólidos deben romperse antes de comenzar cualquier procedimiento de aislamiento del ADN. Normalmente, esto se realiza sometiendo al espécimen a fuerzas mecánicas que proporcionencélulas individuales disociadas con un mínimo de lisis. La rotura mecánica se consigue, generalmente, con un homogenizador. Sin embargo, cuando se desea ADN de gran peso molecular, deben inhibirse las nucleasas manteniendo los especímenes de tejido a temperaturas muy bajas. Para ello, justo después de la escisión, se congela el espécimen en nitrógeno liquido y a continuación se realiza la roturapulverizando el tejido en presencia de hielo seco con un mezclador eléctrico o un mortero y un pistón. Tras sublimar el hielo seco de la mezcla de polvo resultante, pueden resuspenderse las células para iniciar el procedimiento de aislamiento del ADN.
Para los especímenes de sangre, se recoge sangre con acido etilendiaminotetraacetico (EDTA) como anticoagulante. Aunque los leucocitos nucleados sonsolo una pequeña minoría del total de las células sanguíneas, pueden separarse fácilmente del plasma y de los glóbulos rojos mediante centrifugación. La capa resultante de glóbulos blancos se separa y se re suspende en un tampón adecuando para aislar el ADN.

Aislamiento del ADN
Debido al gran tamaño y a la naturaleza frágil del ADN cromosomal, es muy difícil aislarlo en forma intacta. Al diseñarun procedimiento para aislar ADN se requiere poseer cierto conocimiento de la estabilidad química del ADN así como también de sus condiciones en el ambiente celular. Los factores experimentales que deben ser considerados son los siguientes:
* Ph: los enlaces de hidrogeno entre las hebras complementarias son estables entre pH 4 y 10.
* Temperatura: hay una considerable variación en laestabilidad de los enlaces de hidrogeno de la hélice de ADN a la temperatura, sin embargo, la mayoría del ADN comienza a desenrollarse en el rango d 80 a 90°C.
* Fuerza iónica: el ADN es estable y soluble en condiciones salinas. Las concentraciones de sal inferior a 0.1 M debilitan los enlaces de hidrogeno entre las hebras complementarias.
* Condiciones celulares: a) si la fuente de obtencióndel ADN fuera de tipo bacterial, es preciso lisarlas. La facilidad con la cual la pared celular es alterada varía de un organismo a otro. b) varias enzimas están presentes en la célula que pueden actuar para degradar al ADN, sin embargo, el daño mas serio es aquel causado por la desoxiribonucleasas. c) el ADN nativo esta presente en la célula como complejos ADN-proteínas. Las proteínas pueden...