Nutricion

OBJETIVOS. Practicar la cromatografía como método para separación de lípidos. Realizar la cromatografía en papel de muestras biológicas para separar los lípidos presentes.

MATERIALES Y EQUIPOS.

1 atomizador.
1 cámara de cromatografía de 7 x 20 cm.
1 mortero con mano.
1 papel Whatman No. 1 para cromatografía
5 tubos de ensayo de 10 X100.
5 tubos capilares.

REACTIVOS YSUSTANCIAS.

Acetona.
Benceno.
Etanol.
Solución de benceno/etanol (2:1).
Solución de anilino naftalén sulfónico (ANS).
Muestra de tejido animal o vegetal.

PROCEDIMIENTO.

1. Maneje los solventes en campana para vapores.
2. No respire los vapores.
3. Colóquese ropa de algodón para protección (bata).
4. Revise que las llaves de gas estén cerradas.
5. Revise que las llaves deagua estén cerradas.
6. Revise que las llaves de aire comprimido estén cerradas.
7. Revise que los contactos eléctricos estén libres.
8. Revise que los interruptores de luz del laboratorio estén encendidos.
9. Revise que los extractores de aire estén encendidos.
10. Revise que la Acetona esté en la campana.
11. Revise que el benceno esté en la campana.
12. Revise que el etanol esté enla campana.
13. Revise que el Agua destilada esté sobre la mesa.
14. Colóquese los guantes de nitrilo.
15. Lave el material con agua corriente y detergente.
16. Enjuague el material con agua destilada.
17. Seque el material con franela o con papel absorbente.
18. Enjuague el material con etanol.
19. Seque los guantes de neopreno con franela o con papel absorbente.
20. Colóqueseanteojos de policarbonato o monogógles incoloros.
21. Coloque un espejo de 1 cm de espesor mezcla de solventes en la cámara.
22. Tape la cámara de cromatografía para que se sature.
23. Coloque el papel Whatman lo sobre papel envoltura.
24. Limpie la regla con que va a marcar.
25. En el papel Whatman marque con lápiz una línea a 2 cm del borde
26. Marque puntos equidistantes de acuerdo conel número de muestras.
27. Macere 1 g de tejido (vegetal o animal) con 20 ml de solvente.
28. Filtre la mezcla.
29. Con un capilar aplique gota a gota la solución en el punto correspondiente
30. Seque en cada aplicación con la pistola de aire.
31. Coloque la hoja dentro de la cámara.
32. Tape la cámara.
33. Deje correr hasta que el solvente haya ascendido unos a 1 cm del bordesuperior.
34. Saque el papel y se deje secar al aire completamente.
35. Revele las muestras a contraluz; iluminando con UV* o rociando con ANS.
36. Marque con lápiz cada una de las posiciones
37. Determine el Rf de cada uno.
38. Identifique los componentes de las muestras.
39. Deseche los residuos orgánicos.
40. Lave y enjuague el material.
41. Seque el material con papel o con franela.42. Guarde y entregue el material y los equipos.
43. Revise que no haya reactivos en la campana.
44. Apague la campana de extracción.
45. Revise que no haya reactivos sobre la mesa.
46. Revise que la mesa esté limpia y seca.
47. Revise que las llaves de gas estén cerradas.
48. Revise que las llaves de agua estén cerradas.
49. Revise que las llaves de aire comprimido estén cerradas.50. Revise que los contactos eléctricos estén libres.
51. Revise que los extractores de aire estén apagados.
52. Revise que los interruptores eléctricos del laboratorio estén apagados.
53. Retírese el equipo de protección personal.
54. Guarde el equipo de protección personal.
55. Revise que la luz del laboratorio esté apagada.
56. Queme los residuos orgánicos en un incinerador confiltro y trampa.

OBSERVACIONES.
Mida la distancia que recorrió el solvente en la cromatografía en papel y la distancia que recorre cada muestra tomando desde el punto de aplicación hasta el centro de la mancha. Calcule el Rf de cada una de las manchas problema. Identifique su problema. Clasifique a los lípidos encontrados en orden decreciente de polaridad.

INTRODUCCION.

Cromatografía....