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Pontificia Universidad Católica de Chile
Facultad de Ciencias Biológicas
Bases Físicas de los Procesos Biológicos
BIO-152C






Trabajo Práctico Nº1

DIFUSIÓN
Y
PERMEABILIDAD DE LA MEMBRANA DE ERITROCITOS























INTRODUCIÓN Y OBJETIVOS

Primeramente es necesario aclarar conceptos generales respecto a la difusión, comola difusión misma, la cual se definió como el lento movimiento de moléculas individuales de una región a otra (1). En otras palabras, las partículas tienden a entremezclarse espontáneamente impulsadas por la agitación termal. En consecuencia, es posible realizar dos especulaciones, la primera es que al incrementar el número de partículas a difundir ocurre lo mismo con la velocidad del proceso dedifusión, y la segunda que al aumentar la temperatura del medio sucede algo similar.

Particularmente, en la difusión de azul de metileno, las partículas de éste tienen a entremezclarse con las del agua, y el proceso puede ser observado y cuantificado. En el presente informe, se entregan los resultados de un procedimiento que observar comparar la distancia del azul de metileno difundido versus eltiempo ante diferentes concentraciones molares del azul de metileno, y ante distinta temperatura de su medio acuoso.

Respecto a otro tema, la membrana plasmática de las células posee la característica de ser semipermeable implicando que la atraviesan las moléculas esenciales, mientras que otras moléculas no pueden. Todo esto, con el fin de mantener un ambiento interno constante.(2)

Porcierto, existe un modelo útil para estudiar la permeabilidad de la membrana: Los eritrocitos. Los cuales poseen una particularidad observable respecto a la regulación de su volumen intracelular. La segunda parte del práctico consistió en la observación de los dos fenómenos asociados a dicha regulación en eritrocitos: la crenación y la hemolisis.

OBJETIVOS
1. Evidenciar el proceso de difusiónbajo diversas condiciones de temperatura y concentración de soluto.
2. Reconocer la hemolisis y la crenación en eritrocitos de mamífero en función de la osmolaridad extracelular.
3. Estudiar las características de permeabilidad de la membrana plasmática de eritrocitos humanos a diferentes solutos.

















MATERIALES Y METODOS

Para Difusión del azul de metileno:MATERIALES:

Capsulas de Petri de 90 mm
Agua a T° ambiente, 4°C y 40°C
Azul de metileno 0,5%; 0,25% y 0,025%
Micropipeta de 200um
Puntas de 200um
Papel milimetrado
Termómetro

METODO:

Primera Parte:
Disponga de dos capsulas de Petri A y B, con 25 mL de agua. Cada una a distinta temperatura: 4ºC y 40ºC, respectivamente.
Luego, con la micropipeta es deposite 30 sin distorcionar la gotaal retirar el instrumento. Inmediatamente después, comienze a registrar el tiempo. Para medir la distacia recorrida por la gota en intervalos de dos minutos, durante los primeros 16 minutos.
Segunda parte:
Coloque tres capsulas Petri: C, D y E, con 25mL de agua cada una. Después con una micropipeta pona una gota de azul de metileno de 0,5%; 0,25% y 0,025%, e cada capsula de Petrirespectivamente. Precausion al retirar la punta de la micropipeta para no deformar la gota. De inmediato, comienze a registrar el tiempo y a medir la distacia recorrida por la gota, en intervalos de dos minutos, durante los primeros 16 minutos.

Para permeabilidad de la membrana de eritrocitos:

MATERIALES:

Sangre
Tubos de ensayo
Soluciones de NaCl, NH4Cl, glucosa, glicerol y urea
Agua destiladaDetergente
Cronómetro

METODO:

12 tubos de ensayos se rotulan de 1 al 12. Con las soluciones indicadas en la tabla de datos[1]. Luego se le añade una gota de sangre a cada una y se mezcla dos veces por inversión. Al minuto, observe. Deje reposar y observe de nuevo.







RESULTADOS

Difusión del azul de metileno


(Figura 1)
En la figura 1 se muestra el comportamiento entre...