Obtenci N Y Evaluaci N De Un Suero Aglutinante Polivalente Para La Identificaci N Presuntiva De Vibrio Cholerae 01

Obtención y evaluación de un suero aglutinante polivalente para la identificación presuntiva de Vibrio cholerae 01
Martha J. Alfonso González,1 Lázaro Regalado Alfonso,1 Nibaldo González Sosa,2 Eugenio Cisneros Despaigne,3 Virginia Leyva Castillo4 y María Isabel González González5
1. Especialista de I Grado en Microbiología. Investigadora Agregada. Centro de Investigaciones Científicas de laDefensa Civil.
2. Licenciado en Microbiología. Investigador Agregado. Centro de Investigaciones Científicas de la Defensa Civil.
3. Especialista de II Grado en Microbiología. Investigador Agregado. Profesor Instructor. Instituto de Nutrición e Higiene de los Alimentos.
4. Licenciada en Biología. Investigadora Agregada. Instituto de Nutrición e Higiene de los Alimentos.
5. Licenciada enMicrobiología. Investigadora Auxiliar. Instituto Nacional de Higiene, Epidemiología y Microbiología.
RESUMEN
Se describe la obtención de un suero aglutinante polivalente en conejos inoculados con suspensiones vivas de Vibrio cholerae 01 que fue evaluado por aglutinación frente a 26 cepas de Vibro cholerae 01 y 69 de Vibrio cholerae no-01, otros Vibrios, enterobacterias, bacilos gramnegativos y otrosagentes de diferentes orígenes: alimentos, aguas y pacientes con una sensibilidad y especificidad del 100 % respectivamente. La aglutinación fue intensa (3-4 x), rápida (en los primeros 30 s) y de fácil lectura. Los resultados demuestran su utilidad para la identificación presuntiva de Vibrio cholerae 01.
Palabras clave: VIBRIO CHOLERAE/aislamiento y purificación; AGLUTINATION/immunología; CONEJOS.INTRODUCCION
Especies de Vibrio son habitantes naturales del ambiente acuático y la mayoría de las infecciones gastrointestinales provocadas por ellos son adquiridas por exposición a tal fuente o a la manipulación y/o consumo de alimentos derivados de éstos, mal cocidos o lavados.1
La severidad de la enfermedad en humanos varía, la forma más debilitante y seria es la causada por el Vibrio cholerae01.1,2
En 1991 el cólera epidémico se reportó en Perú y su extensión era probable para el resto del área teniendo en cuenta además que su endemicidad está muy relacionada con la persistencia del agente causal en su reservorio natural.3,4
Desde entonces se reactivó nuestro Sistema de Vigilancia Epidemiológica que incluyó el estudio de alimentos marinos, aguas y muestras clínicas.
A pesar de losadelantos disponibles, el diagnóstico del cólera continúa siendo convencional4-7 y resulta epidemiológicamente importante identificar presuntivamente al Vibrio cholerae 01, por ello es necesario disponer de un suero aglutinante polivalente. El objeto de nuestro trabajo fue obtener dicho suero.
MATERIAL Y METODO
Antígeno para inmunización
Se preparó a partir de cultivo en agar sangre al 5 % deVibrio cholerae 01 serotipo Ogawa e Inaba, obtenido del cepario del Centro de Investigaciones Científicas de la Defensa Civil y sometido a control de pureza mediante coloración de gram, identidad serológica frente a sueros aglutinantes (Wellcome y Difco) y observación del estado de disociación.
Comprobadas las características de los cultivos, se cosecharon y resuspendieron en solución salina a laconcentración deseada, comparándola visualmente con la escala de MacFarland.6,8
Inmunización
Se realizó en conejos machos, cepa Nueva Zelandia de 3 kg de peso y sanos. El esquema se extendió por 6 semanas y se utilizó la vía endovenosa, 2 veces por semana, para dosis crecientes de antígeno hasta 1,5 mL. Una semana después de la última inoculación se desangraron los animales y se separó el sueropor centrifugación.6,8
Determinación del título y dilución de trabajo del suero obtenido
Se desarrolló la técnica de aglutinación en lámina ampliamente usada como método semicuantitativo.9 Se usó el suero puro y diluciones dobles progresivas con solución salina 0,85 %. Un volumen fijo de suero se enfrentó a un volumen fijo de antígeno homólogo preparado igualmente en solución salina y a una...