Obtencion De Alfa Amilasas

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OBTENCIÓN DE AMILASAS FÚNGICAS A PARTIR DE Aspergillus sp.
AISLADO DE SEMILLAS DE LENTEJAS
C. Castro1, C. Navas2, O. Caro3, Y. Piñeros4*
1, 2, 3
Estudiantes Ingeniería de Alimentos, Universidad de Bogotá Jorge Tadeo
Lozano, Bogotá, Colombia
4
Docente Ingeniería de Alimentos, Universidad de Bogotá Jorge Tadeo Lozano,
Bogotá, Colombia
Dirección electrónica: yinethpineros@gmail.com
1.RESUMEN
La importancia de producir amilasas fúngicas mediante aplicaciones
biotecnológicas está dirigida esencialmente al área de alimentos y a la
producción de biocombustibles.
El objetivo del trabajo fue aislar
microorganismos productores de amilasas para producir este tipo de enzimas.
Las cepas productoras de enzimas hidrolíticas del almidón se detectaron a los 18
días medianterevelador de Lugol (I2KI=0.026%I2+0.26%KI). Las cepas fueron
aisladas y cultivadas sobre salvado de trigo para la producción de amilasas
(Aspergillus sp.). La actividad amilásica se determinó utilizando almidón como
sustrato a 37ºC durante 10 minutos y se cuantificó mediante azúcares
reductores. El equivalente de dextrosa (DE) fue de 6,5, lo cual muestra su
capacidad enzimática.
2. INTRODUCCIÓN
Elfin primordial que persigue la biotecnología y los métodos de selección
utilizados dentro de la misma, consiste en desarrollar procedimientos prácticos
que permitan el aislamiento y la selección de microorganismos de interés
industrial (Doran, 1998). Las amilasas son enzimas que catalizan las reacciones
hidrolíticas del almidón, dando origen a diversos productos que poseen una gran
relevanciapara algunas operaciones y procesos industriales. Las amilasas son
comúnmente halladas en animales y en plantas; sin embargo, para fines
industriales, las más utilizadas son aquellas de origen bacteriano o fúngico. Las
amilasas poseen una gran importancia en la producción de alimentos y de
biocombustibles (Whiteburst, 2002; Fennema, 2000).
Las α-amilasas presentan una gran utilidad tantopara la industria textil como
para la de alimentos pues rompen la molécula del almidón en fracciones más
cortas (dextrinas). Actúan directamente sobre los enlaces α-1,4 de la molécula,
dando origen a moléculas como la maltotriosa, maltotetraosa, maltopentaosa y
maltohexaosa, entre otras (Fennema, 2000).

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Se han utilizado amilasas para la obtención de jarabes fructosados.
La
producciónde dichas enzimas se ha hecho a partir de Bacillus sp. Aún se siguen
buscando microorganismos específicos que reporten mejores rendimientos para
optimizar los procesos industriales (Doran, 1998; Fennema, 2000).
3. METODOLOGÍA
3.1. Aislamiento de microorganismos productores de amilasas
Se aislaron microorganismos, a partir de 5 g de lentejas sobre medio YPD (1.5%
extracto levadura, 2.0%peptona, 2.0% dextrosa, 2.0% agar-agar, 5% NaCl), e
incubación a 28ºC durante 7 días. Posteriormente se seleccionaron los
microorganismos productores de amilasas, mediante cultivo en agar almidón (al
1%) a 28ºC durante 7 días. Las cepas productoras de enzimas hidrolíticas del
almidón se detectaron a los 18 días mediante revelador de Lugol (I2KI = 0.026%
I2 + 0.26% KI). Las esporas de las cepasdetectadas se suspendieron en Tween
80 al 0.01% y se llevaron a cultivo sobre salvado de trigo estéril (121ºC
durante 15 minutos, autoclave Selecta CD 4043720) en fermentación en fase
sólida a 28ºC durante 7 días.
3.2. Extracción del complejo enzimático
Las enzimas extracelulares luego de la fermentación en fase sólida se extrajeron
con solución 1% de NaCl, en una relación 50 mL/100 g desalvado, mediante
agitación durante 30 minutos y posterior filtración.
3.3.

Medición actividad enzimática

La actividad amilásica se determinó utilizando almidón soluble (Merck) como
sustrato. Se utilizó una solución de almidón tamponada (0.05% almidón, NaCl
0.15M, CH3COONa 0.1M, pH 5).
La reacción enzimática consistió en incubar
10μL de extracto enzimático junto con 0.5 mL de solución de...