Obtencion De Clorofila

Introducción


La clorofila es una familia de pigmentos que se encuentran en diversos eucariotas que poseen cloroplastos (algas y plantas). Estas proporcionan su color verde y son capaces de absorber la luz necesaria para fotosíntesis. Cuando nosotros realizamos una extracción de un vegetal obtendremos distintos pigmentos vegetales tales como:

Clorofilas (a, b) -> coloración verdesCarotenoides (carotenos y xantofilas) –> coloración amarilla


Ya teniendo conocimiento anteriormente sobre tecinas de destilación o extracción, durante este práctico se podrá a prueba un método de extracción por solvente. En este caso separaremos la clorofila desde la espinaca, y igualmente obtendremos las Carotenoides. Existen distintos tipos de extracciones por solvente pero en esta oportunidadocuparemos la maceración; esta consiste en dejar en contacto el sólido que contiene el o los solutos que se desean extraer, en contacto con un disolvente adecuado (frio o caliente). Generalmente el sólido se muele en un mortero o molina adecuado para ofrecer mayor superficie en contacto con el solvente y facilitar la solubilización. La extracción y reconocimiento de estos distintos pigmentos esinteresante para el estudio y conocimiento de sus propiedades ya que seguramente nunca ibas a imaginar que existían tantos pigmentos en una pequeña proporción de hoja.


















Materiales
3 hojas de Espinaca

Mortero

Probeta de 100ml

Vaso precipitado 100ml

Vidrio de reloj

Embudo Buchner

Embudo de decantación

Soporte UniversalDoble tornillo

Matraz Kitasato

Sistema de filtración al vacio

Tubos de ensayos

Papel filtro

Balanza analítica



Soluciones/Reactivos

Éter de petróleo.

Metanol.

Etanol.

Solución de NaCl saturada.

Benceno.

Hidróxido de potasio en metanol.

Solución de HCl.

Nitrito de sodio.

Acido sulfúrico.Procedimiento


• Machacar en un mortero 3 hojas de espinaca aproximadamente.

• En una probeta de 100 ml realice una mezcla extractora que contenga: 50ml de éter de petróleo, 22 ml de metanol y 8 ml de benceno.

• En un vaso precipitado vacíe las espinacas y agregue 65 ml de la mezcla extractora, dejándola reposar por 30 min tapado con un vidrio reloj. Los 15 ml restantesdejarlos para lavado final.

• Realizar una filtración al vacio utilizando un embudo Büchner.

• Al residuo que queda en el papel filtro agregarle los 15 ml de mezcla extractora.

• En un embudo de decantación agregar 50 ml de agua destilada.

• Agregar el filtrado que está en el matraz kitasato al embudo de decantación.

• Mezclar con mucho cuidado agitando yprocurando cada ciertos intervalos de tiempo liberar la presión girando la llave a la posición de abierto, para que salga el aire que se encuentra adentro del embudo.

• Deje reposar en el soporte universal hasta completar la separación de la fase orgánica y acuosa.

• Separar las fases retirando la fase inferior(Acuosa) del embudo en un vaso precipitado para su posterior eliminación enel bidón desechos orgánicos.

• La parte superior(Orgánica) se deja dentro del embudo y sobre ella se agrega 10 ml de 10% p/v de una solución de Hidróxido de potasio en metanol.

• Deje reposar y observe la internase, luego agregue 10 ml de agua destilada y agitar. Notar el cambio de color en la capa de metanol-agua(fase de menor volumen)

• Separar ambas fases. La inferiorde metanol- agua contiene la clorofila; se debe depositar en un tubo de ensayo y el restante desecharlo, tratando de no dejar presencia de esta solución en la fase superior orgánica.

Separación de Xantofilas y Carotenos.
• A la fase orgánica que queda en el embudo agregue 15 ml de etanol al 92%, 10 ml de agua destilada y luego agitar. Guardar la fase inferior.

• Agregar al embudo...