obtencion de DNA de E. coli
Páginas: 14 (3262 palabras)
Publicado: 16 de septiembre de 2015
OBTENCIÓN DE DNA DE E. coli
Leidy Arias 1427328 (arias.leidy@correounivalle.edu.co)
Danna Trejos 1423913 (danna.trejos@hotmail.com)
María Alejandra Vargas 1422542 (mariaalejandravargaspalacio@gmail.com)
UNIVERSIDAD DEL VALLE
Fecha de recepción: mayo 28 de 2015
RESUMEN: 0,3
El DNA es una macromolécula formada por unidades de azúcar, ácido fosfórico y una base heterocíclica; presente entodos los seres vivos como información genética. Durante la práctica se extrajo DNA de Escherichia coli para un reconocimiento cualitativo y cuantitativo. Para esto se usó el método de Mamur modificado, utilizando una suspensión con E.coli en solución salina-EDTA, a la que se adiciono lisozima y mantuvo a 37 °C por media hora, a la solución resultante se agregó lauril sulfato de sodio a 60°C por10 minutos. Seguido se adiciono perclorato de sodio y cloroformo-alcohol isoamilico con agitación durante 30 minutos para después centrifugar y obtener el sobrenadante. A este se sumó etanol y se extrajo el DNA con una varilla de agitación. El DNA obtenido se diluyo en solución salina-citrato y se usó para la prueba cualitativa, adicionando reactivo de difenilamina y comparando con una blanco desolución salina-citrato y complejos patrones de RNA y DNA. Además se usaron muestras de diferentes concentraciones de la solución patrón de DNA para cuantificar el DNA extraído de E.coli, mediante el reactivo de difenilamina y la regresión lineal de una curva guía. En la prueba de reconocimiento cualitativo se obtuvo un resultado positivo para la solución patrón de DNA y la mezcla extraída deE.coli. La cantidad de DNA obtenido de la suspensión de E.coli fue de 0.0068 mg/ml.
Palabras clave: DNA, método de Mamur, Escherichia coli, nucleótidos, lisis, difenilamina.
INTRODUCCIÓN:0,9
El DNA está íntimamente asociado con el material genético de las células, su función es almacenar información genética y servir de molde a través del RNA, para el ordenamiento de aminoácidos en lasproteínas (Plummer, 1978). La molécula de DNA es un polímero que se forma por enlaces fosfodiester entre miles de desoxinucleótidos. Esta unidad estructural contiene un ácido fosfórico, azúcar de 5 átomos de carbono y una base nitrogenada. El DNA contiene 4 bases nitrogenadas: adenina y guanina (que derivan de la purina) y citosina y timina (que derivan de la pirimidina). El genoma de las bacteriasfrecuentemente se encuentra en una sola molécula circular de DNA. Cada molécula contiene una región a partir de la cual se inicia su replicación. Este DNA tiene un tamaño muy grande en relación con el volumen que ocupa en la célula, haciendo que se encuentre en una estructura muy compacta denominada nucleoide, que contiene, además de la molécula de DNA condensada aproximadamente 1000 veces, moléculasde RNA, enzimas como la RNA polimerasa, las topoisomerasas y proteínas básicas. En muchas bacterias pueden encontrarse plásmidos, moléculas adicionales de DNA más pequeñas. El tamaño pequeño de estas moléculas y la posibilidad de purificarlas, adicionarles o quitarles fragmentos de DNA y de introducirlas nuevamente a las bacterias, permitió el nacimiento de la ingeniería genética (Jiménez &Merchant, 2003).
El modelo actual de nucleoide más completo es el de la bacteria E. coli. Este modelo propone que en la célula, la molécula circular de DNA cerrada de 4,64 x 106 pares de bases (aproximadamente 4,300 genes) y alrededor de 1 mm de longitud, se encuentra organizada en asas con superenrollamiento plectonémico (en donde un eje imaginario que pasa por el centro de la hélice del DNAforma una hélice en el espacio). Alrededor de 50% del DNA se encuentra, además, en superenrollamiento toroidal, alrededor de proteínas similares a las histonas de células eucariotas. Sin embargo, presentan una organización menos compleja que las histonas en la cromatina y se disocian más fácilmente del DNA (Jiménez & Merchant, 2003).
Los métodos empleados en el aislamiento de DNA varían según la...
Leidy Arias 1427328 (arias.leidy@correounivalle.edu.co)
Danna Trejos 1423913 (danna.trejos@hotmail.com)
María Alejandra Vargas 1422542 (mariaalejandravargaspalacio@gmail.com)
UNIVERSIDAD DEL VALLE
Fecha de recepción: mayo 28 de 2015
RESUMEN: 0,3
El DNA es una macromolécula formada por unidades de azúcar, ácido fosfórico y una base heterocíclica; presente entodos los seres vivos como información genética. Durante la práctica se extrajo DNA de Escherichia coli para un reconocimiento cualitativo y cuantitativo. Para esto se usó el método de Mamur modificado, utilizando una suspensión con E.coli en solución salina-EDTA, a la que se adiciono lisozima y mantuvo a 37 °C por media hora, a la solución resultante se agregó lauril sulfato de sodio a 60°C por10 minutos. Seguido se adiciono perclorato de sodio y cloroformo-alcohol isoamilico con agitación durante 30 minutos para después centrifugar y obtener el sobrenadante. A este se sumó etanol y se extrajo el DNA con una varilla de agitación. El DNA obtenido se diluyo en solución salina-citrato y se usó para la prueba cualitativa, adicionando reactivo de difenilamina y comparando con una blanco desolución salina-citrato y complejos patrones de RNA y DNA. Además se usaron muestras de diferentes concentraciones de la solución patrón de DNA para cuantificar el DNA extraído de E.coli, mediante el reactivo de difenilamina y la regresión lineal de una curva guía. En la prueba de reconocimiento cualitativo se obtuvo un resultado positivo para la solución patrón de DNA y la mezcla extraída deE.coli. La cantidad de DNA obtenido de la suspensión de E.coli fue de 0.0068 mg/ml.
Palabras clave: DNA, método de Mamur, Escherichia coli, nucleótidos, lisis, difenilamina.
INTRODUCCIÓN:0,9
El DNA está íntimamente asociado con el material genético de las células, su función es almacenar información genética y servir de molde a través del RNA, para el ordenamiento de aminoácidos en lasproteínas (Plummer, 1978). La molécula de DNA es un polímero que se forma por enlaces fosfodiester entre miles de desoxinucleótidos. Esta unidad estructural contiene un ácido fosfórico, azúcar de 5 átomos de carbono y una base nitrogenada. El DNA contiene 4 bases nitrogenadas: adenina y guanina (que derivan de la purina) y citosina y timina (que derivan de la pirimidina). El genoma de las bacteriasfrecuentemente se encuentra en una sola molécula circular de DNA. Cada molécula contiene una región a partir de la cual se inicia su replicación. Este DNA tiene un tamaño muy grande en relación con el volumen que ocupa en la célula, haciendo que se encuentre en una estructura muy compacta denominada nucleoide, que contiene, además de la molécula de DNA condensada aproximadamente 1000 veces, moléculasde RNA, enzimas como la RNA polimerasa, las topoisomerasas y proteínas básicas. En muchas bacterias pueden encontrarse plásmidos, moléculas adicionales de DNA más pequeñas. El tamaño pequeño de estas moléculas y la posibilidad de purificarlas, adicionarles o quitarles fragmentos de DNA y de introducirlas nuevamente a las bacterias, permitió el nacimiento de la ingeniería genética (Jiménez &Merchant, 2003).
El modelo actual de nucleoide más completo es el de la bacteria E. coli. Este modelo propone que en la célula, la molécula circular de DNA cerrada de 4,64 x 106 pares de bases (aproximadamente 4,300 genes) y alrededor de 1 mm de longitud, se encuentra organizada en asas con superenrollamiento plectonémico (en donde un eje imaginario que pasa por el centro de la hélice del DNAforma una hélice en el espacio). Alrededor de 50% del DNA se encuentra, además, en superenrollamiento toroidal, alrededor de proteínas similares a las histonas de células eucariotas. Sin embargo, presentan una organización menos compleja que las histonas en la cromatina y se disocian más fácilmente del DNA (Jiménez & Merchant, 2003).
Los métodos empleados en el aislamiento de DNA varían según la...
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