Obtencion de un hibridoma

OBTENCIÓN DE UN HIBRIDOMA

Hibridomas: Células fusionadas




Los hibridomas son células híbridas capaces de producir anticuerpos monoclonales. Se combinan las características de un mielomael cual tiene una expectativa de vida infinita y un linfocito B que sintetiza un tipo de anticuerpo.

Etapas en la producción de un hibridoma

Etapas en la producción de un hibridoma
I.Inmunización  La inmunización requiere inyectar al animal (ratón, M. musculus) con el antígeno contra el cual se desea obtener un anticuerpo.  Se requiere un período de 3 a 4 semanas para observar unarespuesta máxima en la producción del anticuerpo.

Etapas en la producción de un hibridoma
II. Aislamiento de linfocitos y fusión con células (mieloma HGPRT-)  Las células aisladas del bazo(linfocitos) son fusionadas con células de mieloma el cual posee un marcador genético (HGPRT-), el cual permite entonces en el siguiente paso de selección.

Procedimiento de fusión

Etapas en laproducción de un hibridoma
III. Selección genética (hibridomas)


Luego del proceso de fusión de células resultará en una población heterogénea que tendrá células originales sin fusionar, células quepueden haber sufrido lisis y células híbridas.

Base molecular para la selección de hibridomas




 

Entre las células híbridas es importante seleccionar aquellas que se hayan fusionado yque estén produciendo el anticuerpo de interés. La base para la selección de células es distinguir ciertas características genéticas. Una de ellas es el crecimiento efectivo en cultivo. Esta se basaen las trayectorias para la síntesis de purinas.

Rutas para la síntesis de purinas
A.

B.

Síntesis “de novo”: Requiere al menos 11 pasos, tres amino ácidos y tetrahidrofolato (THF) para quela síntesis culmine. Trayectoria alterna (salvage pathway): Utiliza un solo sustrato (hipoxantina o guanina) y la enzima HGPRT hipoxantina guanina fosforibosil transferasa para obtener purinas....