Obtención de dna de slaiva

Protocolo de obtención de DNA de saliva

Obtención de células
1. Hacer un raspado de mucosa bucal con un hisopo de algodón estéril, raspar 30 veces la parte interna de cada mejilla para obtenerlas células. Hacer esto dos veces y colocar el hisopo en otro tubo, una vez que se obtienen las células por centrifugación se pueden juntar para obtener mayor cantidad de DNA
2. Colocar el hisopoen un tubo de 1.5 ml, añadir 1 ml de solución salina fisiológica y enjuagarlo en el fondo y contra las paredes del tubo. Se puede utilizar el vórtex para desprender más fácil las células.
3.Colocar el hisopo en una solución de cloro (blanqueador para ropa) al 30% para descartarlo.

Extracción de DNA
1. Transferir las células/solución salina fisiológica a tubos de 1.5 ml, y centrifugara 14,000 rpm. durante 1 min.
2. Descartar el sobrenadante y resuspender en 150 L de solución de lisis (Tris HCl 25mM, pH 8.0 y 50 µg/ml de proteinasa K). Resuspender con cuidado utilizando lamicropipeta. Aquí se puede utilizar los mismos 150 l de la solución de lisis para recuperar las células del segundo tubo.
3. Incubar a 56°C x 15 minutos.
4. Enfriar a temperatura ambiente por 30segundos.
5. Agitar durante 15 segundos.
6. Calentar en baño a ebullición por 10 minutos.
7. Enfriar a temperatura ambiente 2 minutos.
8. Agregar 70 l de NaOAC 3M pH6. Mezclar porinversión.
9. Adicionar 400 l de etanol al 100% frío, mezclar por inversión y refrigerar 2 hrs a -70°, o dejar toda la noche para mejores resultados.
10. Centrifugar a 14,000 rpm durante 2minutos
11. El DNA se observa en el fondo del tubo como un paquete blanco.
12. El sobrenadante se puede eliminar y resuspender en agua para hacer PCR
13. Si se utiliza para mantenerloprecipitado deberá de mantenerse en etanol al 100% y guardarlo en un recipiente sellado para evitar la evaporación del etanol.

Cuestionario
1. ¿Por qué se emplea una solución salina fisiológica?...