OBTENCIÓN DE LA CURVA DE CALIBRACIÓN Y FACTOR ESTÁNDAR: DETERMINACIÓN DE GLUCOSA






INTRODUCCIÓN

La glucosa es la principal fuente de energía en los seres vivos. Por tal razón es un metabolito fundamental en los procesos biológicos.
La determinación cuantitativa de este biocompuesto, ha sido objeto de muchos estudios y la literatura ofrece diversas técnicas de análisis que varían de acuerdo con diferentes factores como la naturaleza de la muestra, los contenidosde glucosa y la viabilidad experimental.
El primer objetivo será a) integrar los conceptos teóricos de espectrofotometría en las determinaciones bioquímicas, aplicando la Ley de Lambert y Beer, que se fundamenta en la cantidad de luz absorbida por la sustancia que dependerá del número de moléculas interpuestas en el trayecto del haz de luz, de la naturaleza de la sustancia en solución y de lalongitud de onda de la luz monocromática empleada. Utilizando un estándar de glucosa de concentración conocida nos ayudara a conseguir el segundo y tercer objetivos b) determinar el factor estándar y c) construir una curva de calibración de glucosa.
Estos datos nos ayudaran a obtener nuestro último objetivo que es d) determinar la concentración de glucosa en muestras de sangre por el método gráficoy analítico, que son métodos sencillos, accesibles, útiles y más utilizados, en general nos ayudan para el análisis cuantitativo de biomoléculas.











MARCO TEÓRICO

Varios métodos de análisis de material biológico se basan en hacer reaccionar la sustancia, que se ha de analizar, con otras sustancias (reactivos) para producir una solución coloreada, de tal forma que laintensidad del color pueda ser usada como una medida de la concentración de dicha sustancia.
El método de análisis cuantitativo denominado espectrofotometría se basa en la capacidad de las sustancias de absorber luz, a una longitud de onda (λ) determinada, en proporción directa a la cantidad de materia presente. Mediante el espectrofotómetro se obtiene una medida de valor de la absorbancia de una muestraa determinada longitud de onda.
Al incidir un haz de luz de determina longitud de onda sobre una muestra, parte de esta luz es absorbida y la otra parte es reflejada o transmitida, siendo la cantidad de luz absorbida por la muestra directamente proporcional a la concentración de la muestra (a mayor concentración mayor adsorción y menor transmisión). Esto se conoce como la Ley de Lambert y Beer,esta ley se cumple solo en ciertos de concentración, que varían de una sustancia a otra, por lo que debe comprobarse su aplicación para cada metodología que se utilice. Así, por ejemplo, en la determinación de glucosa sanguínea, la Ley de Lambert y Beer se cumple hasta una concentración de 600 mg/dL de glucosa, mientras que en la determinación sanguínea de triglicéridos, esta ley se cumple hastauna concentración de 1000 mg/dL de triglicéridos1.
Teniendo en cuenta que los valores normales de glucosa en sangre son 70 a 110 mg%, pero en casos patológicos pueden ser: menores de 70 mg% o sobrepasar largamente el valor de 110 mg%, se debe utilizar un método bioquímico que permita detectar niveles de glucosa en un amplio rango de concentraciones2.

La concentración de glucosa en la sangrearterial es más elevada que en sangre venosa debido al consumo de glucosa por parte de las células. En ayunas estas diferencias son del orden de 0,10-0,25 mmol/L, pero después de la ingestión de alimentos pueden ser de hasta 0,80 mmol/L. Los especímenes obtenidos por punción capilar son una mezcla de sangre procedente de vénulas, arteriolas y capilares, por lo que la concentración de glucosa seráintermedia entre la de la sangre arterial y la de la sangre venosa.
La concentración de glucosa en la sangre disminuye desde el momento de su recogida debido a la glucolisis leucocítica y eritrocítica. Este descenso oscila entre el 13% y el 6% después de 1 hora a temperatura ambiente y entre 10% y el 30% a las 4 horas. Para evitar este descenso es preciso centrifugar la sangre de inmediato. El...