OBTENCIÓN DE ORGANOS LINFOIDES

Laboratorio de Inmunología

OBTENCIÓN DE ORGANOS LINFOIDES

INTRODUCCION

El bazo, ganglios Linfáticos, timo y Ia médula ósea poseen células hematopoyéticas y linfoides en distintas etapas de maduración, que pueden ser sometidas a análisis numérico o funcional en el Laboratorio. Algunos de estos órganos constituyen Ia fuente de origen de los leucocitos, son los sitios de tránsito activo delos linfocitos para interaccionar con otros tipos celulares, enviar o recibir señales provenientes de otros órganos, o son campos de batalla entre el sistema inmune y un microorganismo extraño.

En algunos padecimientos infecciosos, malignos, etc., estos órganos sufren cambios notables en su tamaño o composición celular, debido a Ia hiperproliferación o migración de los linfocitos al tejido y Iasubsiguiente acumulación de células inflamatorias

OBJETIVO

Realizar Ia disección de un ratón o rata para identificar diversos órganos linfoides y hematopoyéticos, tales como el bazo, timo y huesos largos (médula ósea), así como extirparlos y hacer una suspensión de las células en buffer fisiológico y observar las células mononucleares al microscopio.

FUNDAMENTO

Pare optimizar Iaactivación de las respuesta inmunes especificas son necesarias las interacciones entre las células linfoides, fagocitos mononucleares y otras células accesorias. Es indispensable que estén localizadas y anatómicamente concentradas en órganos o tejidos definidos, los cuales son los sitios en donde los antígenos son transportados. Tal compartamentalización no es fija y Ia mayoría de los linfocitosrecirculan y constantemente se intercambian entre Ia circulación y los tejidos.

MATERIAL

I Ratón blanco o rata

Pedazo de cartón

Campo / Tape

Estuche de Disección

Malla metálica

Solución fisiológica inyectable.

3 Pipetas de transferencia

1 Jeringa de insulina

Portaobjetos

Émbolo de jeringa

Caja Petri

Vaso con Hielo

Tubos

Centrífuga

Colorante WrightAceite Inmersión

Microscopio

PROCEDIMIENTO

Sacrificio del animal: Sostener al ratón por Ia cola y de manera preferente colocarlo sobre una superficie rugosa (una malla metálica de caja de ratón seria lo ideal o cartón) para que las patitas no patinen en Ia mesa de trabajo. Para sacrificar al ratón mediante dislocación cervical, se asegura Ia cabeza del ratón agarrando con los dedos pulgar eíndice de (a mano izquierda una buena porción de doblez de piel exactamente detrás de las orejas y sintiendo el cráneo apretado contra una superficie plana.

Inmediatamente, se jala de manera decidida y fuerte, Ia cola del ratón para provocar Ia dislocación cervical, es dejar Ia separación de Ia cabeza del resto del cuerpo. Debe oírse y sentirse Ia separación de los huesos del cuello y sentirse Iacabeza floja.

Este procedimiento es el más aceptado éticamente para sacrificar un ratón, ya que es el que provoca menos dolor y sufrimiento del animal. La dislocación desconecta el sistema nervioso central del resto del cuerpo y el animal ya no puede experimentar dolor.

Disección y obtención del Bazo.-

Colocar al animal muerto sobre una superficie y asegurar las 4 patitas tape, de talforma que el tórax y el abdomen nos queden claramente expuestos para trabajar. Cuando se requiere trabajar en forma estéril, se debe empapar Ia zona de trabajo de Ia piel del ratón con alcohol. A continuación, con Ia ayuda de una pinza sostenida con Ia mano izquierda, se estira un pedazo de piel del vientre y con las tijeras sostenidas con Ia mano derecha se corta Ia piel.

Se sigue cortando hastadejar al descubierto el lado izquierdo del vientre. Se localiza el bazo como un órgano de color rojo oscuro y alargado y con ayuda de las pinzas y las tijeras se extirpan y se coloca sobre una caja de Petri que contenga de 5-10 ml de PBS o solución fisiológica inyectable.

A fin de hacer una suspensión de células, se disgrega el tejido presionándolo contra una malla metálica con ayuda de Ia...