Obteniendo hebras de ADN


Trabajo practico de laboratorio: Obteniendo hebras de ADN

Introducción
A Continuación se describe un método simple para aislar el ADN y el ARN de un tejido Vegetal (en este caso Allium cepa). En primer lugar, el tejido se rompe mediante un procedimiento mecánico. A continuación, las medranas celular y las que rodean el núcleo se degradan empleando detergente doméstico.Los fragmentos de la célula se separan por filtración. Los ácidos nucleicos y las proteínas solubles permanecen en la solución. Las proteínas se degradan mediante una enzima (pepsina), y los ácidos nucleicos se extraen en etanol frio.
El descubrimiento del ADN por friederich Miescher
Friederich Miescher nació en Suiza, en 1844. En el laboratorio de Hopper-Seyler, Miescher empezó su carreracientífica tratando de entender las bases químicas de los procesos celulares. Las células que Miescher escogió para su investigación fueron los leucocitos, los cuales son células blancas que se encuentran con abundancia en el pus de las heridas. Miescher empezó a purificar leucocitos a partir de vendas de pacientes.
Luego de seleccionar de entre todas las vendas a aquellas que cumplían con elestricto control de calidad de Miescher, él podía pasar a la obtención de células y al estudio de sus componentes Miescher pudo comprobar que los lipidos y las proteínas eran los constituyentes principales del citoplasma de los leucocitos. Durante el estudio de la constitución de las células, hubo algo que llamó la atención de Miescher: cuando él agregaba soluciones ácidas a sus extractos se obtenía unprecipitado. Es decir, que algunos componentes celulares en presencia de soluciones ácidas perdían su capacidad de solubilizarse y se “hundían” hacia el fondo de los tubos que contenían a las muestras. Esto podía revertirse cuando se agregaban soluciones alcalinas al medio. Para poder analizar con más profundidad a este precipitado nuevo, Miescher se propuso purificarlo.

Miescher tenía todaslas evidencias para suponer que el “precipitado extraño” provenía específicamente del núcleo celular, de manera que tuvo que idear, además, el primer protocolo para extraer núcleos celulares, algo que nunca antes se había logrado. Luego de aislar a los núcleos, Miescher comprobó que agregando un exceso de ácido acético o agregando ácido clorhídrico, se formaba de nuevo el precipitado, confirmandoasí que éste provenía del núcleo. Por esta razón, Miescher nombró a la nueva sustancia “nucleína”.
Una de las principales preocupaciones de Miescher era encontrar una manera de eliminar proteínas contaminantes en la nucleína. Paradójicamente, la manera que se deshizo de las proteínas contaminantes fue agregando otra proteína a la muestra: la pepsina, cuya función es degradar a otras proteínas cuandoreconocen una secuencia de aminoácidos en particular, y se obtenía a partir del estómago de los cerdos. Luego que Miescher agregó la pepsina y después de dejar que actuara durante un intervalo de tiempo de hasta 72 horas, Miescher podía estudiar a la nucleína para intentar caracterizarla.
Miescher quemó la nucleína para saber qué elementos la componían. Sus observaciones confirmaron que era unamolécula orgánica, pues contenía carbono, hidrógeno, oxígeno y nitrógeno, pero que a diferencia de las proteínas, carecía de azufre. Además, a diferencia de las proteínas, la nucleína contenía cantidades inusualmente de fósforo.
Objetivo
Aislar ácidos nucleicos a partir de tejidos de una cebolla (Allium cepa).
Preparación previa
El etanol utilizado debe estar muy frío, por lo que se colocóen el congelador, en una botella de plástico, al menos 24 horas antes de iniciar la actividad.
Materiales
Licuadora doméstica.
Cuchillo de cocina, tabla de cocina.
Embudo de plástico.
Recipiente de hielo.
2 vasos de precipitados de 250 ml.
Papel de filtro de café.
Cebolla mediana.
10 ml de detergente.
3g de sal de mesa.
10 ml de agua destilada.
1 tubo de ensayo.
1 gradilla...