oclusion
Hígado de pollo
Agua (destilada o mineral)
Sal de mesa
Bicarbonato sódico
Detergente líquido o champú
Etanol frío
Batidora
Nevera
Gasas
Vaso
Tubo de ensayo Varilla fina
REALIZACIÓN
1. Preparar el tampón con los siguientes ingredientes y mantener en la nevera o en un baño de hielo triturado:
o 120 ml de agua, si es posible destilada y si nomineral. No usar agua del grifo.
o 1,5 g de sal de mesa, preferiblemente pura.
o 5 g de bicarbonato sódico.
o 5 ml de detergente líquido o champú.
2. Elegir la muestra que va a proporcionar elADN ( de 15 a 20 g de hígado de pollo ) y cortarla en cuadraditos.
3. Triturar la muestra con un poco de agua en la batidora accionando las cuchillas a impulsos de 10 segundos. Así se romperánmuchas células y otras quedarán expuestas a la acción del detergente.
4. Mezclar en un recipiente limpio 5 ml del triturado celular con 10 ml del tampón frío y agitar vigorosamente durante al menos 2minutos. Separar después los restos vegetales más grandes del caldo molecular haciéndolo pasar por un colador lo más fino posible. Lo ideal es centrifugar a baja velocidad 5 minutos y después pipetearel sobrenadante.
5. Retirar 5 ml del caldo molecular a un tubo de ensayo y añadir con pipeta 10 ml de alcohol isoamílico enfriado a 0ºC. Se debe dejar escurrir lentamente el alcohol por la carainterna del recipiente, teniendo éste inclinado. El alcohol quedará flotando sobre el tampón.
6. Se introduce la punta de una varilla estrecha hasta justo debajo de la separación entre el alcohol y eltampón. Remover la varilla hacia delante y hacia atrás y poco a poco se irán enrollando los fragmentos de mayor tamaño de ADN. Pasado un minuto retirar la varilla atravesando la capa de alcohol con locual el ADN quedará adherido a su estremo con el aspecto de un copo de algodón mojado.
CONCLUSIONES
En esta practica se logro el objetivo principal y planteado que es la extracción del ADN...
Regístrate para leer el documento completo.