odontologia

INTRODUCCIÓN

















































Parte Experimental

A.Extracto crudo de ureasa con Biuret.
Procedimiento:

Relizamos la pueba de Biuret a el extracto crudo de ureasa preparado con semillas de zapallo previamente a el laboratorio.
En un tubo de ensayo añadimos 1 ml del extrato de ureasay 1 ml del reactivo de Biuret.

Resultados:
La prueba de Biuret para la ureasa dio positiva porque la solución originalmente anaranjadosa palido se tornó un color púrpura grisaceo.


B. Especificidad de la Ureasa
Procedimiento
Se rotulan dos tubos de ensayo y se le agrega a unos de los tubos 1 mL de acetamida, al segundo 1 mL de urea, luego a los dos tubos se les agrega 2 mL de ureasa yuna gota de rojo fenol. Se observan los cambios y se anotan los cambios observados.
Observaciones:
Tubo #1: 1 mL de acetamida + ureasa + rojo fenol: dio negativa de color amarilla
Tubo # 2: 1 mL de urea + 2 mL de ureasa + 2 gotas de rojo fenilo: positiva de color rosado intenso.

Acetamida

Cuestionario
a. ¿En cuál de los tubos hubo evidencia de que ocurrió una reacción?
En el tubo quecontenía la urea, ya que se torno de un color rojo-rosado intenso.
b. ¿Cuál de las dos sustancias empleadas en la prueba es el sustrato específico sobre la cual actúa la ureasa?
El sustrato específico es la urea.
C. Efecto de la concentración de la enzima sobre la velocidad de la reacción.

Procedimiento:
Enumeramos 4 tubos de ensayo, luego pasamos pasamos las disoluciones que se indican acontinuación a cada tubo.

Tubo
Disolución de urea
1M(ml)
Extracto de ureasa
(ml)
Agua destilada(ml)
1
2
0.0
3.0
2
2
0.5
2.5
3
2
1.0
2.0
4
2
2.0
1.0

Posteriormente agregamos 2 gotas de la disolución de rojo fenol a cada tubo, mesclamos bien y observamos la coloración inicial en cada uno de ellos. Dejamos reposar y observamos cual es el primero en el que el indicador adquiereun colorrojo definido.

Resultados:
A medida que aumentaba la cantidad de ureasa en las soluciones el cambio de color era más intenso, tendiendo de un rosado puro a un rojizo.

Urea
Rojo Fenol


Cuestionario:
a. A qué se debe el cambio de color del indicador?
El cambio de color del indicador se debe a que el pH de la disolución era óptimo para que la ureasa exhibiera su actividadenzimática y trabajara con el sustrato presente en el compuesto.
El rojo fenol cambia a amarillo si está en un medio ácido y a rojo si está en un medio básico.
b. ¿Qué producto de la reacción es responsable del cambio de pH en el medio reaccionante?
El producto de la reacción responsable del cambio de pH es el amoniaco (NH3)
c. ¿En que tubo se llevó a cabo la reacción enzimática a mayorvelocidad? Por qué?
La reacción enzimática a mayor velocidad se llevó a cabo en el tubo 4 que contenía 2ml de urea , 2ml de el extrato de ureasa y iml de agua porque había mayor cantidad de la anzima.

CH. Influencia de la Temperatura sobre la actividad enzimática
Procedimiento:
Se rotulan 4 tubos de ensayos se colocan en la gradilla y se le adiciona a cada uno 2 mL de urea, 2 ml de agua y 2 gotas dela disolución de rojo fenol.
Luego el primer tubo se deja en la gradilla, el segundo lo llevamos a un baño maría el cual esta a 40° y el tercer tubo lo llevamos a calentar en baño maría hirviendo, el cuarto tubo se deja también en la gradilla, a este tubo se le agregará la solución de urea calentada del tubo 3. Una vez calentados los tubos 2 y 3 se le agrega 1 mL de urea a los tubos 1, 2 y 3 seagitan los 4 tubos y se anotan los cambios.
Observaciones:
Tubo#1: urea + ureasa = se tornó de color rojo-rosada
Tubo#2: urea + agua + rojo fenol (calentada a baño maría a 40° por unos minutos) = se obtuvo un color rojo menos intenso que le primer tubo #1.
Tubo#3: urea + agua + rojo fenol (calentado en baño maría hirviendo) = se obtuvo un color similar al tubo#1. Un color rojo-rosado....