organelos

Organelos Separación

En los años 1950 y 1960, los científicos utilizaron dos técnicas para estudiar los organelos celulares: microscopía y fraccionamiento. Christian de Duve fue en la vanguardia de fraccionamiento celular. A principios de 1950, utilizó centrifugación para distinguir un organelo nuevo, el lisosoma, desde fracciones previamente caracterizados: el núcleo, las mitocondriasricas fracción, y los microsomas. Poco después, él utilizó equilibrio de la densidad centrifugación para descubrir otro orgánulo.
Fondo
Las células eucariotas son altamente organizadas y compuesta de estructuras conocidas como organelos celulares que realizan funciones específicas. Aunque la microscopía ha permitido a los biólogos para describir la localización y la apariencia de varios orgánulos,es de uso limitado en el descubrimiento de la función del orgánulo. Para hacer esto, los biólogos celulares han basado en una técnica conocida como fraccionamiento de la célula. Aquí, las células se rompen, y los componentes celulares se separan en función de su tamaño, masa y densidad usando una variedad de técnicas de centrifugación. Los científicos entonces podrían aislar y analizar loscomponentes celulares de diferentes densidades, denominadas fracciones. Usando este método, los biólogos tenían dividida a la célula en cuatro fracciones: núcleos, mitocondria, microcosmos, y jugo celular. De Duve fue un bioquímico interesado en las enzimas metabólicas ubicaciones en el sub-celular. Él ya había completado un gran cuerpo de trabajo sobre el fraccionamiento de las células del hígado, en quehabía determinado la localización sub-celular de numerosos enzimas. Mediante la localización de estas enzimas en la celda específica fracciones, podría empezar a dilucidar la función de los orgánulos.
Se ha señalado que su trabajo se basó en dos hipótesis: el "postulado de homogeneidad bioquímica" y
"El postulado de la única ubicación." En resumen, estas hipótesis proponen que toda lacomposición de una población sub-celular contendrá las mismas enzimas, y que cada enzima se encuentra en un sitio discreto dentro de la célula. Armado con estas hipótesis y la herramienta de gran alcance de la centrifugación, de Duve subdividió la fracción mitocondrial rica. En primer lugar, identificó la fracción ligera mitocondrial, que es compuesto de enzimas hidrolíticas que se conocen actualmente paracomponer el lisosoma. Luego, en una serie de experimentos que se describen aquí, identificó otra fracción sub-celular discreto, que él llamó el perioxisoma, en el mitocondria rica fracción.
El Experimento
De Duve estudió la distribución de enzimas en células de hígado de rata ya que es muy activo el metabolismo energético, el hígado contiene un número de enzimas útiles para estudiar. Parabuscar la presencia de diversas enzimas durante el fraccionamiento, se basó en ensayos de enzimas, para la actividad enzimática. Para conservar la actividad enzimática máxima, tuvo que tomar precauciones, que incluye la realización de todas las etapas de fraccionamiento a 0 ° C porque el calor desnaturaliza a la proteína, que podría comprometer la actividad enzimática. De Duve utiliza centrifugaciónpara separar los componentes celulares por etapas de centrifugación sucesivas. Quitó hígado de la rata y se partió por la homogeneización. La preparación cruda de células homogeneizadas se sometió a continuación a una relativa baja velocidad de centrifugación. Este paso inicial separó el núcleo de la célula, que recoge como sedimento en la parte inferior del tubo, a partir del extractocitoplasmático que permanece en el sobrenadante. A continuación, de Duve subdividió el extracto citoplasmático en fracción mitocondrial pesada, la luz fracción mitocondrial, y la fracción microsomal. Él logra separando el citoplasma mediante el empleo de sucesivas etapas de centrifugación de fuerza cada vez mayor. En cada paso, se recogen y almacenan las fracciones de la enzima posterior análisis. Una...