organizacion subcelular

Introducción
Con la invención del microscopio, la célula dejo de ser un misterio, dicho objeto ha ido avanzando notoriamente conjunto con la tecnología, entregándonos cada vez más información sobre esta unidad tan importante. La comunidad científica utiliza los microscopios eléctricos con el objetivo de poder observar organelos, por la facultad que poseen de formular imágenes tridimensionales,pero a la vez entrega una visión que se encuentra sobrepoblada de organelos, que dificulta su diferenciación y estudio de estos, lo que nos lleva a la importancia del fraccionamiento celular, técnica utilizada para separar los componentes de la célula, en fracciones celulares utilizando técnicas de centrifugación y sedimentación (1). Está en sí tomo notoriedad cuando en 1974 en donde Duve juntoa Claude y Palade ganaron el premio nobel por sus trabajos de fraccionamiento celular, para conocer los componentes celulares, identificando con azul de tripán por primera vez organelos separados como los lisosomas (2). El fraccionamiento comienza con una buena homogenización, que básicamente es el rompimiento de la estructura de la célula, llegando a este de diversas formas como la lisis de lasenzimas de la pared celular, el rompimiento mecánico empleado mediante el uso de moledores que pueden triturar el tejido congelado o también se puede picar el tejido con cuchillas como es el caso, en el uso de tijeras o maquinas moledoras y a su vez lograr una homogenización por un shock osmótico o el congelamiento y descongelamiento de forma reiterada de una célula, como podemos ver existenvariados métodos para lograr una buena homogenización. El siguiente paso es el filtrado del tejido homogenizado para eliminar fracciones de células que no fueron fraccionadas, esto se lleva a cabo gracias a la centrifuga quien separa por densidad y tamaño, el fraccionamiento con estas siempre quedaran dos fracciones que corresponden al pellet y al sobrenadante, para la ultracentrífugas las cualesson mucho más rápidas y logran ir fraccionando, ya que a menor tamaño del organelo o sustancias mayor es la velocidad que se requiere al fraccionarlo (3). Al trabajar componentes ricos en proteínas y otros de gran importancia deben ser trabajados bajo temperaturas muy estrictas de 0 a -5°C ya que la acción de estas proteínas pueden generar alteraciones en la fracciones subcelulares, ya que lasproteínas del cuerpo trabajan bajo la temperatura de 37° C y se necesita inactivarlas para detener su actividad enzimática (4). Ya listos los fraccionamientos, es necesario identificar a que organelo corresponde a la fracción, para esto se deben usar marcadores los que básicamente determinaran la presencia de actividad enzimática específica de ciertos organelos (3), el fraccionamiento permitió a loscientíficos estudiar funciones y composición de los organelos celulares sin embargo esto no se hubiese podido llevar a cabo utilizando una célula entera sin fraccionar.





Objetivos

Como objetivo de este trabajo pretendemos:
1. Comprender la importancia y funcionamiento de la técnica de fraccionamiento subcelular, para poder utilizar correctamente los componentes requeridos para lainvestigación.
2. Además observar e identificar las muestras, “fracción mitocondrial, fracción nuclear y la fracción microsomal”.
3. También diferenciar lo que es un sobrenadante y un pellet,
4. Utilizar reactivos para reconocimiento de una fracción subcelular en particular, con el propósito de provocar cambios del color característico con los cuales se puedan reconocer distintos organelos.5. Observar organelos bajo un microscopio, dibujando lo observado.


















Materiales y Métodos
Experimento N°1: (previamente preparado por la profesora)
Proceso de preparación de muestras: Tomo el hígado de pollo y lo lavo 5 veces con suero fisiológico, picó el hígado en pequeños trozos, lo dejo en un vaso precipitado manteniéndolo en hielo, luego aplicó suero...