Orquideas in vitro

PROPAGACIÓN DE ORQUÍDEAS

TIPOS DE PROPAGACION IN VITRO
Las técnicas de propagación in vitro de orquídeas pueden ser de dos tipos:

1. PROPAGACION POR SEMILLAS
a. Por semilla Proveniente de Cápsula Dehiscente
Se utilizan semillas de cápsulas dehiscentes. Las semillas son esterilizadas con una solución de Hipoclorito de calcio o Hipoclorito de sodio (lejía comercial) en concentraciones quevarían entre 0.5 a 10 %, por 10-30 minutos, tiempo que depende del tipo de semillas que se esta usando. Para favorecer la esterilización de las semillas es conveniente usar un agente que rompa la tensión superficial de la solución esterilizante (Tween-20), este es un agente que permite el mejor contacto del esterilizante con la semilla. Se utiliza Tween-20 a razón de dos gotas por cada 100 ml,pero este puede también ser reemplazado por detergente líquido casero. Las soluciones de Hipoclorito de calcio o de sodio son los esterilizantes más usados, aunque puede emplearse también peróxido de hidrógeno al 3% por 30 minutos (Show 1985).
Luego de la esterilización las semillas son enjuagadas tres veces en agua destilada estéril, para posteriormente ser sembrada en los medios de cultivo.
b.Por Semilla Proveniente De Cápsula No Dehiscente (Cápsula Verde)
En este caso se siembran semillas provenientes de cápsulas so dehiscentes. La cápsula es separada de la planta madre, se eliminan las partes que no serán necesarias o que puedan ser una fuente de contaminación (restos de pétalos y de columna), se enjuaga con agua y detergente y se sumerge por unos segundos en alcohol etílico al 75%.Luego se estiriliza sumergiéndola en una solución de Hipoclorito de calcio al 2 o 4 % por 20 minutos.
La siembra se realiza directamente sin necesidad de enjuague. Para abrir la cápsula se hacen dos cortes longitudinales a lo largo de la sutura de dehiscencia y dos cortes transversales, se retira el pedazo de cápsula seccionado y se procede a la siembra.
2. PROPAGACION VEGETATIVA O CLONAL
Sehan desarrollado distintos métodos de propagación por meristemas dependiendo del tipo de explante brotes vegetativos en crecimiento, los cuales son esterilizados en Hipoclorito de calcio o de sodio al 4% por 20-30 minutos. Luego se enjuagan en agua destilada estéril y se procede al aislamiento y siembra de los meristemas o de las yemas.
Otro tipo de vegetación vegetativa se lleva a caboutilizando las yemas de los brotes de vara floral, esta técnica ha sido aplicada con éxito en Cymbidium y Phalaenopsis (Intuwong et. la., 1972). Consiste en el corte de nudos que contienen yemas dormantes, su esterilización, enjuague y siembra en medios de cultivo con hormonas que inducen la formación de nuevas plántulas a partir de esas yemas.
Se ha usado también ápices foliares jóvenes de plántulascultivada in vitro para la obtención de protocormos en Cattleya con éxito solo en el caso de utilizar como explante hojas muy jóvenes (Churchill. et. al., 1971). Los trabajos de propagación de especies como Cattleya y Plalaenopsis, abriendo la posibilidad de propagar especies hortícolas importantes sin afectar los órganos vegetativos de las mismas.

CONDICIONES DE CULTIVO
Existe una grandiversidad de condiciones y de medios usados en el cultivo in vitro de orquídeas. El estado dl medio de cultivo (líquido o sólido) depende de la especie con la que se este trabajando y debe ser determinado empíricamente. Generalmente la proliferaci_2n es mayor y más rápida en medio líquido y la diferenciación se ve favorecida en substartos o soportes sólidos.
Aún cuando es recomendable la agitacióndel medio líquido, se han obtenido éxitos con cultivos estacionarios (Kako, 1973; citado por Arditti, 1993) y con otros medios líquido agitados solo ocasionalmente (Arditt, 1993). La tasas de agitación rotatoria recomendads varían desde 0.25 r.p.m. (Jasper, 1996) hasta 200 r.p.m. (Scully, 1996). las condiciones apropiadas deben ser determinadas experimentalmente. la agitación del medio de cultivo...