Osmosis Globulos Rojos

Estudio la estabilidad del glóbulo rojo frente a soluciones con distinta tonicidad (transporte de agua y fragilidad de la membrana)

Universidad Austral de Chile, Facultad de Ciencias, Instituto deBioquímica.

Esteban Corales
Néstor Corro
Carolina Ehrenfeld
Introducción
Para poder estudiar como distintas soluciones afectan la integridad de la membrana, es necesario tener ciertasvariables controladas. Además de la temperatura, un factor importante es la concentración de solutos tanto dentro como fuera de una célula, conocido como equilibrio osmótico. El presente protocolo tiene porfinalidad demostrar el efecto de dos soluciones, una hipotónica y otra hipertónica, a base de concentraciones de NaCl, en la integridad de la membrana de glóbulos rojos, llegando como efecto ahemolisis y crenación respectivamente.
Además una tercera solución, isoosmotica de sacarosa, intentará demostrar que la permeabilidad y transporte de agua a través membrana puede ser demostrada en estacondición. La sacarosa, a la mínima posibilidad de atravesar la membrana (por ser un compuesto apolar pequeño), comienza a ingresar, con el consiguiente ingreso de agua (debido a el desequilibrioosmótico que genera el ingreso de soluto a la célula) y el glóbulo rojo debería, comenzar una “hemolisis”, debido a la permeabilidad de la membrana a este compuesto. Midiendo este ingreso a través del tiempose puede calcular el valor de permeabilidad.

1. Recolección
Los glóbulos rojos humanos en solución de preservación del banco de sangre se proceden a centrifugar en tubos de centrífugaplásticos a 2000 rpm durante 10 min a 4°C. El sobrenadante de la centrifugación se desecha y el precipitado que contiene los eritrocitos se resuspende en 0,770 ul corresponden de tampón fosfato-sodio 0.5 M pH7.4 y agua hasta completar 5ml, agitando suavemente y se centrifuga nuevamente. Esta operación se repite hasta que el sobrenadante sea traslúcido.

2. Someter a Soluciones de Diferente...