Oxidacion Ldl

Práctico: estudio de las modificaciones oxidativas de la LDL, análisis del componente lipídico y protéico.
Introducción: La LDL es una lipoproteína de baja densidad (1,019-1,063g/ml ) , la cual se encuentra formada por diversos componentes como son los lípidos, proteínas y antioxidantes. Los lípidos que se encuentran son los ésteres de colesterol y trigliceridos formando el core central, y elcolesterol libre y fosfolípidos formando la monocapa lipidica que lo recubre. También se encuentran ácidos grasos unidos a los distintos lípidos. La principal apoproteína que lo compone es la apo B100, y finalmente los antioxidantes que se pueden encontrar son alfa tocoferol, gamma tocoferol, beta caroteno, alfa caroteno y ubiquinol-10. En el práctico procedimos al estudio de la oxidación de lasdistintas partes que componen a esta lipoproteína, ya que parece estar etrechamente vinculada con la formación de las placas de ateroma. Esto es porque la apo B100 es la proteína ''receptada'' para intenalizar la molécula a las células. Cuando la LDL es oxidada, ya no es captada por los mismos receptores (proceso regulado a la baja) , sino que pasa a ser captada por otros (scavenger) y este procesono está regulado, por lo que se intenaliza mucha LDL a las células, principalmente de músculo liso y macrófagos que migran a la íntima de la arteria y forman ''células espumosas'' que seran el inicio de la placa. Además pudimos verificar como una dieta rica en antioxidantes puede ser muy beneficiosa para el organismo, al retardar la oxidación de la parte lipídica. Objetivos generales: Estudio de laoxidación de la LDL in vitro por cobre, mediante tres técnicas distintas que nos permitirán analizar la oxidacíon de cada uno de sus componentes mensionados anteriormente. 1) OXIMETRÍA Objetivos específicos: Estudio de la oxidación del componente lipídico de la LDL mediante la medición del consumo de oxigeno en el tiempo al agregarle cobre al preparado. Lo que sucedió al agregar el cobre fue queal ser una sustancia oxidante, provoca la disociación del enlace alílico de lípidos insaturados (LH) promoviendo la abstracción del hidrógeno, formando el radical alquilo (L.). Este radical va reaccionando con los antioxidantes, pero luego comienza a reaccionar con el oxígeno formando el radical peroxilo (LOO.) Este es muy importante para la propagación porque una vez formado realiza la oxidaciónde otros LH abstrayendole el hidrógeno y formando más radicales alquilos. Finalmente cuando el oxígeno, o los compuestos lipídicos van disminuyendo, los radicales comienzan a reaccionar entre si formando productos no radicales. LH+Cu+2 ---------> L. (iniciación Cu agente oxidante LH agente reductor) (propagación LOO. agente oxidante LH agente reductor)

L.+O2 -------->LOO. LOO.+LH---->L.L.+O2--------->LOO.

L.+L.---------->LL LOO.+LOO.->LOOL+O2 L.+LOO.----->LOOL (terminación) XH+L.-------->X.+LH XH+LOO.---->X.+LOOH Resultados: Al realizar la gráfica de concentración de oxígeno en función del tiempo se pueden diferenciar las fases de inciación y propagación. En cuanto a la terminación, no se observa, pero si se puede notar una disminución en la velocidad de oxidación. Esto se debe aque el tiempo de observación no fue suficiente, y con más tiempo seguramente lo huebieramos podido observar. el tiempo de latencia es de 9 minutos, y la velocidad máxima de consumo de oxígeno es de 0,5 nmoles/ minuto. (253-239) / (55-27)= 0,5

2) Consumo de carotenoides
Objetivos específicos: Estudio de la oxidación del componente antioxidante de la LDL, en este caso de los carotenoides, através del estudio de la absorbancia con un espectrofotómetro. Primero se midió el espectro de absorbancia de la LDL debido a que en la misma puede haber varios tipo de carotenoides con picos de absorbancia distintos. Para eso utilizamos en primer lugar una solución buffer con LDL y la analizamos con el espectrofotómetro. Para trabajar utilizamos el pico máximo de absorbancia ya que segun la ley de...