P_enzim

Centre de Documentació i Experimentació en Ciències i Tecnologia

Efecte de la concentració de l’enzim sobre l’activitat enzimàtica
Objectius
• Analitzar la velocitat d’acció d’un enzim en funció de la seva concentració
• Treballar els conceptes de concentració, dilució, prova control, etc.
Introducció
El conducte pancreàtic dels pacients que tenen fibrosi quística freqüentment queda bloquejat,reduint o fent impossible del tot l’alliberament d’enzims pancreàtics a l’intestí prim. L’objectiu
d’aquesta activitat és investigar l’efecte de la reducció de la concentració d’enzim sobre la
reacció que catalitza.
L’α-amilasa, és un enzim secretat per les glàndules salivals i pel pàncreas que catalitza
l’hidròlisi del midó, principal molècula de reserva de les plantes. El midó és una molèculacomposta per dos tipus de cadenes: l’amilosa, una cadena lineal formada per residus de
glucosa units per enllaços α-1,4; i l’amilopectina, cadena ramificada, que a part dels enllaços
α-1,4 entre els residus de glucosa, de tant en tant, presenta un enllaç α-1,6, causant de la
ramificació. L’enzim hidrolitza els enllaços α-1,4, originant maltosa i α-dextrina.
Donat que més de la meitat delscarbohidrats que ingerim estan constituïts pel midó, és evident
que l’activitat, correcte, de l’α-amilasa és imprescindible.
Una manera molt fàcil de seguir l’activitat de l’α-amilasa sobre el midó, és utilitzant lugol com a
indicador. El lugol és un reactiu format per Iode i Iodur potàssic, quan afegim unes gotes en
una solució que conté midó, aquesta pren ràpidament una coloració violeta. No es tractad’una
reacció química, sinó que la molècula de Iode té la mida justa per col·locar-se a les hèlix que
forma la cadena d’amilopectina. Si aquestes hèlix desapareixen, com passa en l’hidròlisi del
midó, la coloració violeta desapareix.

Hipòtesi
Formuleu una hipòtesi sobre l’efecte de la concentració de l’enzim sobre la velocitat de la
reacció que catalitza

Material i Equipament
Equipament
−
−
−
−
−
−Reactius i altres materials
Balança
Agitador i escalfador magnètic
Mosques magnètiques
Morter
Cronòmetre
Espectrofotòmetre (opcional)

Efecte de la concentració de l’enzim sobre l’activitat
enzimàtica 1 de 4

−
−
−
−
−
−
−

Pancreoflat (pastilles)
Midó soluble
Lugol
Aigua destil·lada
Retoladors
Tubs d’assaig
Suports pels tubs d’assaig

BIGAS. M. (2005)

Centre de Documentació i Experimentació enCiències i Tecnologia

Procediment
I)

Preparació de la solució enzimàtica

Cada una de les pastilles de PANCREOFLAT conté diferents enzims pancreàtics a una
determinada concentració mesurada en unitats farmacèutiques europees (Uph europees). En el
cas de l’α-amilasa, la concentració és de 6000 Uph.
1) Prepareu la solució mare de l’enzim, triturant en un morter una pastilla i diluint-la en 100 mld’aigua destil·lada.
Calculeu la concentració d’ α-amilasa a la solució mare en Uph/l
a) Transvaseu la solució mare a un vas de precipitats i retoleu-lo.
b) Poseu una mosca magnètica al vas de precipitats i a continuació, poseu-lo en un
agitador magnètic, fins que la pols de la pastilla estigui totalment dissolta.
2) Prepareu les solucions de treball a partir de tres dilucions de la solució mare:Agafeu vuit tubs d’assaig i retoleu-los de l’1 al 4. A cada un dels tubs i preparem les
solucions de treball següents, (ho fem per duplicat):
a)
b)
c)
d)

Solució 1: 5 ml de la solució mare
Solució 2: 2’5 ml de la solució mare més 2’5 ml d’aigua destil·lada
Solució 3: 1 ml de la solució mare més 4 ml d’aigua destil·lada
Solució 4: 5 ml d’aigua destil·lada

Completeu la taula següent:
Taula 1:

mlS.M
Solució 1

ml H2O d

5

Volum
final

Concentració
UpH/l

Observacions

6000

Solució 2
Solució 3
Solució 4

5

II) Preparació de la solució de midó
1) Prepareu 100 ml d’una solució de midó al 0’5%. És a dir, peseu 0’5 grams de midó
soluble i diluïu-los en 100 ml d’aigua destil·lada. El midó és poc soluble per tant, convé
tenir la solució en constant agitació i, si disposeu d’escalfador...