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5336667-27241500-3937-26149300
4000310515center095000INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL
ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLOGICAS
DEPARTAMENTO DE BIOQUÍMICA
“DR.GUILLERMO CARVAJAL SANDOVAL”
LABORATORIO DE MÉTODOS DE ANÁLISIS
PRÁCTICA 4.SEPARACIÓN DE UNA MEZCLA DE AZUL DE METILENO Y FLUORESCEÍNA USANDO CROMATOGRAFÍA POR ADSORCIÓN
AUTOR(A):
CAMACHO LUNA MITZI SORAYA
COLOBORADORE(S):
PÉREZTÉLLEZ INGRID FERNANDA
GRUPO: 5QM1
SECCIÓN: 4
MÉXICO, D.F.,06 de Octubre, 2015
INTRODUCCIÓN
La cromatografía por adsorción se basa en el proceso adsorción-desorción de sustancia contenidas en la fase móvil sobre un sólido estacionario.
En este tipo de cromatografía la fase estacionaria ha de ser un sólido polar de gran superficie (adsorbente). La fase móvil puede ser un gas o un líquido dandolugar a la cromatografía gas-sólido (CGS) o líquido-sólido (CLS). El grado de adsorción varía según la naturaleza y superficie específica de los adsorbentes y naturaleza de los solutos. Los enlaces entre moléculas adsorbidas y el adsorbente han de ser débiles para que su fijación sea reversible, las uniones son debidas a fuerzas intermoleculares (interacciones dipolo-dipolo o puentes dehidrógeno). Como regla general, las polaridades del adsorbente y de los solutos han de ser opuestas.
Cromatografía líquido-sólido (CLS).

La fase estacionaria está constituida por un sólido polar poroso y que esta finamente granulado. La superficie específica contiene centros polares aptos para la adsorción de las moléculas polares presentes en la fase móvil. Al disminuir el tamaño de las partículas,el número de centros activos por unida es mayor, y la capacidad de adsorción se incrementa. El adsorbente más utilizado es gel de sílice aunque también se emplea alúmina activada (Al2O3). En el caso del gel de sílice la interacción se establece entre los grupos Si-OH y Si-O-Si, y los grupos funcionales polares de los compuestos orgánicos. La fase móvil está constituida por un disolvente en el quelos componentes de la mezcla deben ser al menos parcialmente solubles. La velocidad de elución de un compuesto se incrementa al aumentar la polaridad de la fase móvil y se puede utilizar un gradiente de polaridad aumentando con el tiempo la proporción del disolvente más polar.
La retención se realiza en base a la competencia que se establece entre el soluto a separar y las moléculas de la fasemóvil por adsorberse a los centros activos polares de la fase estacionaria. Así las moléculas de soluto se adsorben a los centros activos de la fase estacionaria y van siendo desplazados por las moléculas polares presentes en la fase móvil.4
1388745110045500El tiempo necesario para eluír un compuesto de la columna recibe el nombre de "tiempo de retención" y es característico para cada compuesto enunas condiciones cormatográficas dadas (naturaleza, cantidad y características del adsorbente, fase móvil, diámetro y longitud de la columna, temperatura, presión, etc.).3

Fig 1.Representacion de una Cromatografía en Columna 3
OBJETIVOS
Aplicara la técnica de cromatografía por adsorción para a separación de dos columnas
Comprobará la separación con base en el perfil de elución.
RESULTADOSTabla 1.Valores de absorbancia obtenidos para la separación de fluoresceína y azul de metileno
Volumen de elución (mL) A493 A668
3 0.000 0.000
6 0.135 1.890
9 0.029 0.701
12 0.002 0.100
15 0.002 0.037
18 0.001 0.004
21 0.001 -0.020
24 0.002 -0.012
27 0.000 -0.029
30 0.000 -0.019
33 0.002 -0.024
36 0.005 -0.027
39 0.000 -0.027
42 0.002 -0.023
45 0.001 -0.027
48 0.090 -0.028
51 1.915-0.029
54 1.624 -0.014
57 0.191 -0.033
60 0.086 -0.026
63 0.060 -0.025
66 0.045 -0.011
69 0.033 -0.024
72 0.025 -0.024
75 0.022 -0.018
78 0.021 -0.009
81 0.015 -0.028
84 0.011 -0.026
87 0.016 -0.020
90 0.014 -0.022
Nota: Los valores negativos se tomaron como 0, ya que no se realizó una correcto ajuste de absorbancia con el blanco (agua destilada), lo cual provocó este error....