P7




INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL
ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLOGICAS


DEPARTAMENTO DE BIOQUÍMICA
“DR.GUILLERMO CARVAJAL SANDOVAL”



LABORATORIO DE MÉTODOS DE ANÁLISIS



PRÁCTICA 7.ESTUDIO DE ALGUNOS FACTORES QUE AFECTAN EL ESTABLECIMIENTO DE UN MÉTODO ESPECTROFOTOMÉTRICO.


AUTOR(A):
CAMACHO LUNA MITZI SORAYA

COLOBORADORE(S):


RAMIREZ LEON PAULA ISADORA

GRUPO: 5QM1


SECCIÓN: 4MÉXICO, D.F., 27 DE OCTUBRE, 2015


INTRODUCCIÓN

La espectrometría es un método químico que se utiliza para cuantificar la concentración de analitos utilizando la luz. Los métodos que se auxilian con la luz para llevar a cabo un análisis cuantitativo se le conoce como métodos espectrofotométricos, estos pueden tener una su clasificación dependiendo de la longitud de onda que utilicen parael análisis entre los más conocidos están espectrometría de absorción visible (colorimetría), ultravioleta e infrarrojo. Para considerar a un método espectrofotométrico como cuantitativo primero debe de cumplir ciertas reglas como:

El método seleccionado deber ser específico para cuantificar un analito de nuestro interés.
Que el método esté libre de todas las interferencias posibles al momento dehacer la determinación o en su defecto tratar de controlar lo más posible estas interferencias.
Debe de tener alta precisión, alta exactitud.
El método debe tener una alta sensibilidad, además el límite de detección debe de corresponder a una concentración baja.

Experimentalmente para el establecimiento de un método espectrofotométrico después de optimizar las condiciones químicas del sistema(pH, temperatura, control de interferentes, concentración adecuada de reactivos, solvente apropiado, protección a la luz para evitar reacciones fotoquímica, etc.) que garanticen que se tiene la especie de interés en condiciones adecuadas para la medida se establecen los siguientes parámetros:

Longitud de onda analítica
Intervalo óptimo de concentraciones
Curva de calibración
Sensibilidad del métodoanalítico
Límite de detección

OBJETIVOS

Seleccionar tubos comunes de laboratorio para usarlos como cubetas para el espectrofotómetro.
Manejar algunos de los parámetros que intervienen en el establecimiento de un método espectrofotométrico.
Establecer las condiciones óptimas de los parámetros probados para la aplicación del método.





RESULTADOS
Tabla 1. Selección de tubos comunes parausarlos como celdas
Tubo No
%T 400
(H2O)
Tubo No
%T400
(NiSO4)
1
95.1
1
23.2
2
93.3
2
22.3
3
94.4
3
23.1
4
93.3
4
22.8
5
93.1
5
22.8
6
94.7
6
23.1
7
94.4
7
22.4
8
94.2
8
22.8
9
94.6
9
23.4
10
93.6
10
22.0
11
94.6
11
22.7
12
94.1
12
22.3
13
94.5
13
23.2
14
95.7
14
22.5
15
95.2
15
23.5

a) ¿Sigue esta reacción la ley de Bouger y Beer? Explique.
Dado que el coeficiente de correlación de la curva decalibración se aproxima a uno, todos los puntos siguen una tendencia lineal, por lo cual existe una relación de proporcionalidad entre la absorbancia y la concentración del ión férrico y por tanto se cumple con la ley de Bouger y Beer.

b) Comente acerca de la sensibilidad del método, el intervalo de concentración y escala de lectura útil del aparato.
La pendiente de la recta determina el valor de lasensibilidad del método, en este caso se tiene una pendiente con un valor de 0.155, es decir, se produce un cambio de absorbancia de 0.155 por cada incremento de concentración de analito de una unidad (1 μg/mL). Acerca del intervalo de concentración, se tiene que este va de 0.070-10.811 μg/mL de ión férrico, que corresponde al intervalo donde se obedece la ley de Bouger y Beer; la escala útil deabsorbancia es de 0.009-1.642.
Tabla 2.Curva de calibración de Fe3+ por el método del NH4SNC
Tubo No.
Fe 3+
(g/mL)
A480
(yi)
A ajustada por regresión lineal
(y’)
(yi-y’)²
1
0
0
0
0
2
0.07
0.019
0.018
0.000001
3
0.175
0.027
0.034
0.000049
4
0.35
0.052
0.060
0.000064
5
0.70
0.113
0.113
0
6
1.05
0.138
0.166
0.000784
7
2.45
0.358
0.378
0.0004
8
3.85
0.610
0.590
0.0004
9
5.25
0.816
0.802
0.000196
10...