Paper 2 Arroz De Jucarito

Artículo Científico

Biotecnología Vegetal Vol. 7, No. 1: 3 - 8, enero - marzo, 2007

Empleo de reguladores de crecimiento para la formación de
cloroplastos en callos de arroz (variedad Jucarito-104) cultivados en
luz y oscuridad
Maylin Pérez Bernal*, Yeosvany Cabrera Artiles, Magalis Delgado Rigo, Carlos Alberto Hernández Díaz, Raúl
Armas Ramos. *Autor para correspondencia.
Centro de IngenieríaGenética y Biotecnología de Sancti Spiritus. Apartado 83 CP 60 200. Sancti Spiritus, Cuba.
e- mail: maylin.perez@cigb.edu.cu
RESUMEN
Para promover la formación de cloroplastos en callos de arroz se analizó la influencia de combinaciones de 2,4D y kinetina, así como el efecto de la luz y la oscuridad sobre la callogénesis y regeneración de plantas. Para
detectar la clorofila se tomaron muestrasde callos inmediatamente antes de ser transferidos al medio de
regeneración, y a las 12, 24, 48 y 72 horas de cultivo en este medio y se observaron al microscopio de fluorescencia.
La combinación de 1.0mg.l-1 de 2,4-D y 2.5mg.l-1 de kinetina no afectó significativamente la calidad de la callogénesis
respecto al control sin kinetina, lo cual es conveniente pues la inclusión de kinetina en el mediode formación de
callos puede favorecer el desarrollo de los plastidios. La formación de callos en la luz fue menos eficiente que en
la oscuridad y afectó el porcentaje de plantas regeneradas. A las 24 horas de cultivo en regeneración se detectó la
clorofila por fluorescencia, indicando la presencia de cloroplastos en células meristemáticas en diferenciación. A
las 72 horas se observaronincontables conglomerados fluorescentes. En los callos formados sin kinetina la
clorofila fue detectada por primera vez al cuarto día en forma de pequeños puntos fluorescentes.
Palabras clave: citoquinina, clorofila, regeneración
ABSTRACT
In this study we identify appropriate conditions for early induction of chloroplast in rice callus. It were analyzed
different combinations of 2,4-D and kinetin, andeffect of light and dark on the quality of callus formation and plant
regeneration. We found that1.0mg.l-1 of 2,4-D and 2.5mg.l-1 of kinetin were the best combination for the major
average and quality of embryogenic callus obtained 21 day after culture, without significant effects respect to control
without kinetin. Kinetin is a cytokinin that induces the development of plastids during callusformation. Callus
formation under light was low efficient than at the dark one. In order to detect chlorophyll we used fluorescent
microscopy for analysis of calli samples immediately before transferred them to regeneration media, and 12, 24,
48 and 72 hours after. Only 24 hours of incubation on regeneration media were sufficient to detect chlorophyll by
fluorescent microscopy. Uncountable fluorescentclusters were observed at 72 hours. In callus formed without
kinetin chlorophyll were detected four days after culture as small fluorescent spots.
Key words: chlorophyll, cytokinin, regeneration

INTRODUCCION
La transformación genética de cloroplastos se ha
convertido en una tecnología muy ventajosa para el
mejoramiento de algunos cultivos y la expresión de
proteínas heterólogas en estosorganelos.
Numerosas ventajas hacen de este método una
opción tentativa en la ingeniería genética de plantas,
dentro de las cuales la más significativa es el
aumento de los niveles de expresión del transgén,
superiores entre diez y cincuenta veces respecto a
la expresión nuclear, debido al alto número de copias
del genoma de plastidio en cada célula vegetal (Guda
et al., 2000). Además, la heredabilidadde la
información genética es materna, por lo que se evita
que mediante el polen se dispersen en el ambiente
los nuevos caracteres introducidos, y se eliminan
así posibles daños al entorno. Otra ventaja importante
es que la inserción de los nuevos genes puede ser

dirigida a una región determinada mediante
secuencias que propicien la recombinación
homóloga, lo que reduce los efectos de posición,...