Paper de Bioquimica

BARROSO P., MURCIA H.,
Biomédica 2005;25:496--510 VEGA N., PÉREZ G.

Biomédica 2005;25:496-510

ARTÍCULO ORIGINAL

Obtención y purificación de IgY
dirigidas contra la lectina de Salvia bogotensis
Paola Barroso, Hansen Murcia, Nohora Vega, Gerardo Pérez
Laboratorio de Bioquímica, Departamento de Química, Universidad Nacional de Colombia,
Bogotá, D.C., Colombia.

Introducción. Lasinmunoglobulinas presentes en la yema de huevo de gallina (IgY) han sido
ampliamente utilizadas en inmunología, bioquímica, biotecnología y salud humana y animal.
Aunque presentan una serie de ventajas frente a las IgG de mamíferos, su aislamiento requiere,
por una parte, la eliminación de los lípidos presentes en la yema del huevo sin alterar su
funcionalidad y, por otra, la utilización demetodologías de purificación que permitan una
recuperación tal que haga factible su empleo como herramientas de detección y purificación a
una escala significativa.
Objetivo. Dado el interés que presenta el antígeno Tn como marcador tumoral en muchos
tipos de cáncer, y la capacidad que tiene la lectina aislada de semillas de Salvia bogotensis
para reconocer específicamente este antígeno, seadelantó el presente trabajo con la meta de
disponer de IgY anti-lectina para emplearla en estudios inmunohistoquímicos y de biología
celular.
Materiales y métodos. Se produjo IgY anti-lectina inmunizando gallinas con lectina de S.
bogotensis y se evaluó la respuesta inmune en función de la dosis y del tiempo; se ensayaron
varios métodos de remoción de lípidos y de extracción y se compararon losrendimientos y la
pureza de IgY obtenidas con varios métodos de purificación.
Resultados. El mejor método de delipidación y extracción de IgY requiere dilución con agua,
acidificación del extracto y precipitación con (NH4)2SO4 60%s, recuperándose 43,35 mg de
proteína/yema. La cromatografía tiofílica permite obtener las IgY puras en buena cantidad
(10,4 mg/yema), preservando la funcionalidad ycaracterísticas de estos anticuerpos.
Conclusión. Se establecieron las mejores condiciones para extraer y purificar IgY funcionales
dirigidas contra la lectina de S. bogotensis.
Palabras clave: Lamiaceae, inmunoglobulinas Y, Salvia, lectina, purificación, antígeno Tn.
Purification of IgY against Salvia bogotensis lectin
Introduction. Egg yolk immunoglobulins (IgY) have been extensively used inimmunology,
biochemistry, and biotechnology in studies of human and animal health. However, their use
requires two preparatory steps: first, the egg yolk lipids must be removed without impairing the
immunoglobin functional properties, and second, the isolation methods must allow high
recoveries for further use as detection and purification tools.
Objective. Because Tn antigen presence servesas a tumoral marker and because S. bogotensis
lectin's can specifically recognize this antigen, the current study aims at making available an
anti-lectin IgY. This tool will be useful in histochemical and cellular studies involving transformed
cells.
Materials and methods. Anti-lectin IgY was produced by immunization of hens with S.
bogotensis lectin, and the effect of antigen dose on IgYlevels was assesed. Several methods
for lipid removal, IgY extraction and purification were assayed, and yields and purity of IgYs
were established for each method.
Results. The best delipidation and extraction method included yolk dilution with water under
acidic conditions and (NH4) 2SO4 60%s precipitation from which 43 mg protein/yolk were
recovered. Among the chromatographic methods,thiophilic chromatography permitted the

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PURIFICACIÓN IGY ANTI-LECTINA SALVIA BOGOTENSIS

recovery of a substantial quantity of pure IgY (10.4 mg IgY/yolk). With this method, the function
and characteristics of IgY were preserved.
Conclusion. The best conditions for anti-S. bogotensis functional IgY extraction and purification
were established.
Key words:...