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En el experimento se realizo un estudio a las semillas de las diferentes plantas de tabaco, pertenecientes al género Nicotiana respecto al diferente grado de resistencia a P. hyoscyami f. sp.Tabacina (agente que causa el Moho Azul): las semillas utilizadas fueron Sumatra 104 y Petit Havana SR1 (susceptibles) y N. megalosiphon (resistente), estas se utilizaron para la obtención de posturas, apartir de la técnica de semilleros en bandejas flotantes, con sustrato conformado por cáscara de arroz y turba negra. A los 30 días, las posturas se transplantaron a macetas que contenían el mismosustrato y se mantuvieron en casas de cultivo a 23°C, con una humedad relativa al 90% y períodos de luz y oscuridad de aproximadamente 12 horas, durante 15 días.
Al descubrir que la especie N.megalosiphon es altamente resistente al patógeno que provoca esa enfermedad, se observo que esta utiliza como mecanismo de defensa la expresión del gen que codifica para proteínas de transferencia de lípidos(LTP) GBII10, que provoca que la enfermedad “moho azul” no se desarrolle en ella.
Así para evaluar el efecto que tienen las LTP sobre la resistencia al patógeno en la especie N. tabacum, se determinóla expresión constitutiva de la LTP GBII10 obtenida de N. megalosiphon en plantas de la variedad susceptible de N. tabacum Havana Petit SR1.
Primero se clono el ADN correspondiente quecodifica para la proteína de transferencia de lípidos (LTP) GBII10, esto se realizo en un vector de transformación para obtener plasmidios binarios.
La transformación genética de la planta de N.tabacumvar. Petit Havana SR1 se realizó transformando la cepa GV2260 de Agrobacterium tumefaciens por el método del nitrógeno líquido con los plasmidios binarios desarrollados. Luego, se convirtieron discosde hojas de plantas cultivadas in vitro, utilizando kanamicina como marcador de selección. Los discos de hojas se cultivaron con los clones de A. tumefaciens recombinantes por 48 horas en medio...