papoo

CAPÍTULO 11
Espectrofotómetro
Código (s) ECRI

Denominación (es) ECRI

15-082

Espectrofotómetros de ultravioleta

15-083

Espectrofotómetros de luz visible/ultravioleta

15-084

Espectrofotómetros de luz visible

ESPECTROFOTÓMETRO
La palabra espectrofotómetro se deriva de la palabra latina spectrum, que significa imagen, y de
la palabra griega phos o photos, que significaluz. El espectrofotómetro, construido mediante
procesos avanzados de fabricación, es uno de los
principales instrumentos diagnósticos y de investigación desarrollados por el ser humano. Utiliza las propiedades de la luz y su interacción con
otras sustancias, para determinar la naturaleza
de las mismas. En general, la luz de una lámpara de características especiales es guiada a través
de undispositivo que selecciona y separa luz de
una determinada longitud de onda y la hace pasar por una muestra. La intensidad de la luz que
sale de la muestra es captada y comparada con
la intensidad de la luz que incidió en la muestra
y a partir de esto se calcula la transmitancia de
la muestra, que depende de factores como la
concentración de la sustancia.

Espectrofotómetro modernohttp://www.biochrom.co.uk/images/spectro/ultro100pro_white.jpg

PROPÓSITO DEL EQUIPO
El espectrofotómetro se usa en el laboratorio
con el fin de determinar la concentración de
una sustancia en una solución, permitiendo
así la realización de análisis cuantitativos.

FOTOGRAFÍAS DEL ESPECTROFOTÓMETRO
PRINCIPIOS DE OPERACIÓN
Como principio básico se considera que la luz
es una forma de energíaelectromagnética,
que en el vacío tiene una velocidad constante [C] y universal de aproximadamente 3 x 108
m/s. En cualquier otro medio (transparente)
por el que pase la luz, su velocidad será ligeramente inferior y podrá calcularse mediante
la siguiente ecuación:
C
Espectrofotómetro clásico

v0 =

n

http://ekoineko.nucleo.pl/en/spektofotometry.html#

107

donde:
v=
velocidad através del medio por el
que pasa la luz
n=
índice de refracción del medio, cuyo
valor oscila, por lo general, entre 1,0
y 2,5
La energía electromagnética dispone de una
muy amplia gama de longitudes de onda. Algunos ejemplos se muestran en la siguiente
tabla1:

los que destacan la reflexión, refracción, difracción, absorción, difusión, polarización y
otros que son utilizados en diversosinstrumentos y dispositivos. La siguiente tabla
muestra los rangos de longitud de onda en
donde se utiliza el espectro luminoso para
realizar pruebas de espectrofotometría.
Región del
espectro luminoso

Ultravioleta
Tipo de energía
electromagnética

Rango de la longitud de onda

10-200 nm (nanómetros)

Ultravioleta cercano

200-280 nm

Luz visible

Rango de la longitud
de onda380-780 nm

Ondas de radio

De pocos metros a pocos kilómetros

Infrarrojo cercano

780-3 000 nm

Ondas de radar

De 1 a 10 cm

Infrarrojo medio

3 000-20 000 nm

Infrarrojo lejano

30 000-300 000 nm

Ondas infrarrojas
Luz visible
Rayos X
Rayos gama

-6

De 1 a 10 micras (10 m)
De 300 a 700 nm (nanómetros)
De 0,1 a 0,5 Å (Ángstrom)
Aprox. 0,0012 Å (Ángstrom)

Conrespecto a la interacción de la luz con la
materia, el siguiente esquema ayuda a entender la complejidad de los fenómenos que
ocurren:

La luz, al pasar o interactuar con diversos medios, presenta una serie de fenómenos, entre

Ilustración 27: Interacción de la luz con la materia

1

Lobkowicz, F., Melissinos, A., Physics for Scientists and Engineers, vol. II, Philadelphia, WB SAUNDERSCO., 1975.

108

Espectrofotómetro

El esquema muestra que la radiación incidente
[Io] sufre una serie de transformaciones. Parte
de la misma se refleja [Ir], parte se transmite [It],
parte se difunde [Id] y parte se absorbe e incide
directamente en fenómenos como la fluorescencia [If]. Los fenómenos en los que se basa la
espectrofotometría son principalmente la absorción y la...