para Calligonum, Especies del desierto

PROCEDIMIENTO DE LA EXTRACCIÓN DE DNA

Los materiales de la planta estaban helados en nitrógeno líquido (-196°C) en una tierra y mortero estéril para un polvo fino; 200 mg del polvo congelado de larama verde fueron transferidos a 3ml de amortiguador precaliente de extracción CTAB DNA (65°C) y estuvieron dividido en tres partes cada una en 2ml en tubos estériles Eppendorf. Las pruebasrecibieron inversiones suaves de 5-10 min. Los homogenantes fueron incubados en un baño María caliente mantenido en 65°C por 30 min con intermitente remolineante. Después de la incubación, los homogenantesfueron traídos para alojarse temperatura y cloroformo: El isoamyl alcohol (24:1,v/v) estaba añadido en el volumen igual para los homogenantes y mixto amablemente por la inversión, seguida por lacentrifugación en 10,000 rpm por 15 min.


fig.1 Cuesta sitúa de árboles Calligonum Arich (la izquierda) y arbustos C. comosum (bien) probados de Kammour en la sureña Tunisia. La parte superior: Losárboles Calligonum Arich en duna forman una cresta, arbustos C. comosum en hábitat de la interduna. El fondo: La profundidad de la raíz de C. arich en la cuesta superior y C. comosum en la cuesta hacen elpie de posición

Los sobrenadantes fueron congregados, y un volumen igual (cerca de 700ul) de isopropanol se agregó, y la mezcla colocada sobre hielo. Las pruebas fueron entonces centrifugadas a las10,000 rpm por 10 min, el sobrenadando descartado, y el comprimido DNA lavado dos veces con etanol absoluto. Luego etanol 1 vol. de 70 el % y 1/5 vol. de acetato de amonio (pH 5.2), la ARNasa (20mg/ml) (Q-Biogen: 10 mM Tris-HCl, pH 7.5, y 15 mM NaCl), y la proteinasa K (10 mg/ml) fueron añadidos al comprimido de DNA. Todo fue incubado por al menos 90 min a 37°C. Después de la centrifugación, elcomprimido de DNA fue recobrado decantando lo sobrenadando, acto seguido lavándose dos veces con etanol al 70 %. El comprimido obtenido fue secó con aire hasta que todo el etanol estuviese distante...