Parasitologia

Rev. Chilena de Cirugía. Vol 58 - Nº 6, Diciembre 2006; págs. 441-446 Descripción de genotipos de Echinococcus granulosus obtenidos de especímenes... / Carlos Manterola y cols.

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TRABAJOS CIENTÍFICOS

Descripción de genotipos de Echinococcus granulosus obtenidos de especímenes de hidatidosis humana*
Echinococcus granulosus genotypes in samples of human hydatidosis
Drs. CARLOSMANTEROLA1,2, ANGÉLICA MELO3, MANUEL VIAL1,2, JUAN CARLOS ROA3, JAVIER MORA3
1Departamento 3Departamento

de Cirugía. 2CIGES (Capacitación, Investigación y Gestión para la salud basada en evidencia). de Anatomía Patológica. Facultad de Medicina, Universidad de La Frontera. Temuco, Chile

RESUMEN Introducción: Se ha descrito variabilidad ambiental de Echinococcus granulosus (Eg). Se han reportado 10genotipos y cierta heterogenicidad intergenotipo en estudios con material proveniente de animales. El objetivo de este estudio es describir los resultados de un protocolo de genotipificación de Eg en muestras de hidatidosis humana. Material y método: Estudio de corte transversal. Se recolectó el líquido hidatídico de una muestra consecutiva de pacientes intervenidos quirúrgicamente por hidatidosishepática y pulmonar en hospitales de Temuco entre julio de 2004 y septiembre de 2005. Se diseñó un protocolo de extracción de ADN para Eg en muestras homogeneizadas de aspirado de quistes hidatídicos. Se emplearon 2 sistemas de reacción de polimerasa en cadena (PCR): PCREg9 y PCREg16; ambos en concentraciones de MgCl2 al 2mM. Para PCREg9, se utilizaron los primers Eg9F y Eg9R a concentraciones de0.5 mM, empleándose 35 ciclos con temperatura de hibridación a 60°C. Para PCREg16 se utilizaron los primers Eg16F y Eg16R a concentraciones de 0,5 mM, empleándose 35 ciclos con temperatura de hibridación a 65°C. Los productos de las PCR fueron digeridos con una enzima de restricción (Rsa1) para la discriminación de los genotipos. Resultados: Se analizaron 25 muestras, 4 provenientes de quistespulmonares y 21 de quistes hepáticos. Se logró amplificación de Eg en 22 de 25 muestras (88%). La digestión enzimática reveló la presencia de 3 genotipos posibles: en 21 de 22 muestras (95,45%) se observó un patrón de restricción correspondiente a los genotipos G1 ó G7 y en la muestra restante a los genotipos G4 ó G7. Conclusión: Con los sistemas de PCR empleados se detectó ADN de Eg.
PALABRASCLAVE: Equinococcosis, hidatidosis, genotipos, reacción de polimerasa en cadena.

SUMMARY Introduction: Environmental variability of Echinococcus granulosus (Eg) has been described. 10 genotypes have been reported as well as a certain intergenotype heterogenicity in studies with material of animal origin. The aim of this study is to describe the results of an Eg genotypification protocol in samplesof human hydatidosis. Materials and methods: Cross-sectional study. The hydatid fluid was collected from
*Recibido

14 de Noviembre de 2005 y aceptado para publicación el 6 de junio de 2006. Correspondencia: Dr. Carlos Manterola Departamento de Cirugía, Universidad de La Frontera, Casilla 54-D. Temuco, Chile. Fax: 56-45-325761 E-mail: cmantero@ufro.cl

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2as Pruebas

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a consecutive sample of patients operated on for hepatic and pulmonary hydatidosis at hospitals in Temuco between July, 2004 and September, 2005. A DNA extraction protocol was designed for Eg in homogenized samples of hydatid cyst aspirate. 2 polymerase chain reaction (PCR) systems were used: PCREg9 andPCREg16; both in concentrations of 2mM MgCl2. For PCREg9, Eg9F and Eg9R primers were used at concentrations of 0.5 mM, using 35 cycles with a hybridization temperature of 60°C. For PCREg16 Eg16F and Eg16R primers were used at concentrations of 0.5 mM, using 35 cycles with a hybridization temperature of 65°C. The PCR products were absorbed with a restriction enzyme (Rsa1) in order to distinguish the...