parasitologia

ÍNDICE
INTRODUCCION…………………………………………………………4

SOUTHERN BLOT……………………………………………….………5

NORTHERN BLOT………………………………………………………7

REACCIÓN EN CADENA DE POLIMERASA…………...……………9
¿Qué es la PCR? …………………………………………………9
¿Qué es la reacción en cadena de la polimerasa? …………..………10
¿Con qué ingredientes se practica la reacción?.…………….11 ¿Cómo funciona la reacción?.…………………………….……11Desnaturalización..…..…………….………………………11 Hibridación……………...……………………………..……11 Extensión. ………………………………………..…………12

COMPONENTES DE LA PCR……………………...…………………12

TIPOS DE PCR…………………………………………………………13
1) PCR IN SITU………………………………………..…………13
2) PCR ANIDADA………………………………………..………14
3) PCR MULTIPLEX………………………………………..……15
4) RT-PCR…………………………………………………..……16
5) PCR TIEMPO REAL…………………………………….……16ANEXOS…………………………………………………………………18

BIBLIOGRAFIA…………………………………………………………19








INTRODUCCION

La reacción en cadena de la polimerasa o PCR (siglas de su nombre en inglés Polymerase Chain Reaction ) permite generar una gran cantidad de copias de un fragmento de DNA (ácido desoxirribonulceico). El requisito fundamental para poder llevar a cabo la reacción es disponer de fragmentoscortos de DNA de cadena sencilla complementarios a los extremos del fragmento a amplificar. Estos fragmentos servirán como cebadores para que una enzima polimerasa sea capaz de incorporar nucleótidos complementarios a la cadena molde. Una vez completada la reacción la cantidad fragmento amplificado se puede visualizar mediante técnicas sencillas de separación de fragmentos de DNA.SOUTHERN BLOT
Es un método de biología molecular que permite detectar la presencia de una secuencia de ADN en una mezcla compleja de este ácido nucleico. Para ello, emplea la técnica de electroforesis en gel de agarosa con el fin de separar los fragmentos de ADN de acuerdo a su longitud y, después, una transferencia a una membrana en la cual se efectúa la hibridación de la sonda. Su nombre procede delapellido de su inventor, un biólogo inglés llamado Edwin Southern.

Los pasos para Southern Blot:

1. Extracción del ADN: Se puede extraer ADN de casi cualquier tejido humano.
2. Digestión del ADN con una endonucleasa de restricción. El ADN extraído de la muestra se trata con una endonucleasa de restricción, que es una enzima que corta el ADN bicatenarios en donde tenga una secuenciacaracterística.
3. Electroforesis en gel de agarosa: Tras la digestión del ADN, los fragmentos de ADN resultantes se separan según su tamaño mediante electroforesis en geles de agarosa. Durante la electroforesis, las moléculas de ADN, que poseen carga negativa, migran hacia el electrodo positivo. Al avanzar las moléculas de ADN, su velocidad de migración se ve reducida por la matriz del gel de agarosa4. Preparación de un ensayo de Southern ("Southern Blot"): Tras la electroforesis, las moléculas de ADN separadas se desnaturalizan mientras permanecen en el gel de agarosa, impregnando éste con una disolución alcalina. Tras la neutralización de ésta, el DNA monocatenario resultante se transfiere a la superficie de una membrana de nailon, realizando así una copia o "calco" (la traducción másliteral del inglés Blot, conservando este sentido, es "secante"). Este proceso de desnaturalización y transferencia se conoce como método de Southern en recuerdo de quien lo inventó, Edward Southern.
5. Hibridación con sonda radioactiva: Una sonda de locus único es una molécula pequeña de ADN o ARN capaz de hibridar con el ADN de un fragmento de restricción concreto en el ensayo de Southern. Laformación de la molécula dicatenaria (dúplex) depende del emparejamiento de bases complementarias entre las secuencias de la sonda y del ADN presente en el "calco". Las sondas de locus único se marcan habitualmente con un isótopo radiactivo para facilitar su detección, y se eligen para que detecten un locus genético polimórfico en un solo cromosoma humano.
6. Detección de los RFLPs mediante autor...