Pasante Qfb

I.- Objetivo
Identificación de Streptococcus β-hemolíticos en una muestra de exudado faríngeo.
III.- Resumen
- Características del microorganismo en estudio:
Cocos, gram positivos, crecen en cadenas o pares, catalasa y oxidasa negativos. Streptococcus pyogenes también se denomina Streptococcus β-hemolítico del Grupo A. El método más comúnmente empleado para su identificación es laprueba de susceptibilidad a la bacitracina.
IV.- Recursos
IV.1- Materiales
* Tubos de ensayo con tapón de rosca de 16 x 100
* Tapones de algodón
* Cajas petri
* Asa bacteriológica
* Equipo de tinción
* Mechero de Bunsen
* Espátula
* Matraz Erlenmeyer de 250 ml
* Vidrio de reloj
* Portaobjetos
* Algodón
* Gasas
* Hisopo de algodón estérilcon medio de transporte Stuart
* Guantes desechables
* Supresor lingual (abatelenguas)
IV.2 – Instrumentos
* Microscopio
* Campana de flujo laminar
* Incubadora
* Balanza granataria
* Refrigerador
* Autoclave
* Termómetro
* pH-metro
IV.3 – Medios de cultivo
* Agar base sangre.
* Agar Mueller-Hinton
* Agar bilis esculina

IV.4 –Reactivos
* Agua estéril
* Solución de H2O2 al 30%
* Solución Alcohol/acetona
* Cristal violeta
* Solución yodada de Lugol
* Safranina

Otros:
* Medio de transporte Stuart
* Medio con Hipurato de sodio
* Solución de Cloruro Férrico al 7%
* Discos difusores con antibióticos para antibiograma

V.1- Preparación de medios de cultivo
VI.1.1 Agar base sangreComposición:
* Substrato nutritivo (extracto de corazón y peptona) 20,0
* Cloruro sódico 5,0
* Agar-Agar 15,0

pH: 6,8 ± 0,2 a 25°C

Preparación:
1. Disolver 40 g en un litro de agua desionizada.
2. Calentar conagitación frecuente en baño de agua hirviendo o en corriente de vapor hasta dilución completa.
3. Tratar en autoclave 15 min a 121 °C.
4. Después de enfriar a 50-45 °C añadir, mezclando y sin formación de burbujas 5-8 % de sangre desfibrinizada estéril.
5. Verter en las placas y dejar solidificar a temperatura ambiente.

Medio preparado: Ámbar.

Siembra:
Por inoculación directa delmaterial en estudio, sobre la superficie del medio de cultivo.

Modo de etiquetar:
Etiquetar con fecha de preparación, nombre del medio y fecha de caducidad.

Almacenamiento:
- Medio deshidratado: a 10-35 ºC.
- Medio preparado: a 2-8 ºC.
VI.1.2 Agar Mueller-Hinton

Composición:

* Infusión de carne 300g/l
* Peptona acida de caseína17.5g/l
* Almidón 1.5g/l
* Agar bacteriológico 15g/l

pH: 7.3-7.4 ± 0.2 a 25°C

Preparación:
1. Suspender 37 g del medio deshidratado en un litro de agua desionizada.
2. Dejar embeber de 10 a 15 minutos.
3. Calentar con agitación frecuente y hervir durante 1 minuto.4. Medir el pH.
5. Esterilizar a 121°C durante 15 minutos.
6. Enfriar a 45°-50°C y distribuir a cajas de Petri (o agregar los suplementos que se desee) hasta un nivel de 4 mm sobre una superficie horizontal (25-30 ml en placas de 9 cm de diámetro).

Modo de etiquetar:
Etiquetar con fecha de preparación, nombre del medio y fecha de caducidad.

Almacenamiento:
- Mediodeshidratado: 2-30° C.
V.2 Preparación de reactivos
V.2.1 Cristal Violeta
Composición:

A) Solución Madre de Cristal Violeta:
- Cristal Violeta, Colorante al 85%???? 20 g
- Alchohol Etílico de 95° 100ml

B) Solución Madre de Oxalato:
- Oxalato de Amonio 1g
- Agua desionizada...