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REPORTE LABORATORIO Nº 3 : “DETERMINACION DE LA ACTIVIDAD ENZIMATICA DE LA CATALASA”

Integrantes del Grupo Fecha de entrega

Michael Contreras Aranda
Ángela Tello Segovia
Patricia Hernández Gallardo
Crista Fuentes

---- de Noviembre de 2014

I. OBJETIVOS DEL LABORATORIO


1. Aislar la enzima catalasa a partir de glóbulos rojos humanos.
2. Determinar la actividad enzimática dela catalasa.
3. Observar los cambios de la actividad enzimática frente al PH, Temperatura, concentración de enzimas y concentración de sustrato.


II. METODOLOGÍA


Actividad 1. Obtención de la muestra.

1. En un mortero se puso el hielo para ser molido.
2. Se prepararon 4 tubos de ensayo, cada uno con 20 ml de agua destilada.
3. Se extrae sangre a través de un pinchón en el dedo decuatro personas.
4. Se coloco el hielo molido en un vaso de precipitado, luego se colocaron los 4 tubos de ensayo en el interior del vaso de precipitado con hielo.
5. Las cuatro personas comenzaron a gotear sangre en los tubos de ensayo. (La primera gota de sangre se desecho), hasta completar 0,5 ml de sangre, agitando el tubo constantemente para que la sangre no se congele.
6. El tubo siempredebe estar en frio de lo contrario la enzima que se está agregando se desnaturaliza.



Actividad 2. Efecto de la concentración de Enzima.

1. Se rotularon 5 vasos de precipitado del 1 al 5 y a cada uno se coloco 5 ml de H2O2, 24% con un PH 7. Para llevar un control el vaso precipitado 1 no se agrego enzima, solo se agrego 5 ml de H2SO4 2 N.
2. En los vasos de precipitado 2, 3, 4 y 5. Seañadieron respectivamente 0,1;0,2;0,2 y 0,5 ml de preparación de enzima. Luego de 1 minuto de ser agregada la enzima se agregaron 5ml de H2SO42N para poder detener la reacción.
3. Se rotularon los vasos de precipitados con solución KMnO4 0,05 N, se anotaron los resultados en una tabla.



Actividad 3. Efecto de la Temperatura.

1. Se numeraron 8 matraces de Erlenmeyer, en series de 2 (1A y1B, 2A y 2B, etc) y se procedió a colocar en cada uno 5 ml de H2O2 0,24 % pH 7. Todos los matraces A son controles sin enzima.

2. Colocar todos los matraces por 5 minutos a la temperatura indicada a continuación:
a. Serie 1 (1A y 1B) se colocó a 6°C (hielo) 

b. Serie 2 (2A y 2B) se dejaron a temperatura ambiente 

c. Serie 3 (3A y 3B) se colocó a 36°C. 

d. Serie 4 (4A y 4B) se colocó a50°C.
3. Después se le agregaron a los matraces B 0,5 ml de su preparación de enzima sin sacarlos de la temperatura. Exactamente 1 minuto después de agregar la enzima se le agregó 5 ml de H2SO4 2 N para detener la reacción. Una vez hecho esto se procedió a retirar los matraces de la temperatura. 

4. Luego se procedió a anotar los resultados en una tabla.


Actividad 4. Efecto de la Concentraciónde sustrato.

1. Se rotularon 10 matraces de Erlenmeyer en series de 2 (1 A y b) luego se coloco en cada uno el volumen de H2O2 0,24% pH 7, a los matraces 2, 3, 4, y 5 se añadió, luego, agua destilada para completar.
El matraz numero 1 será el control por lo que no se le agregó enzima, y se le agrego 5 ml de H2SO4 2N.
2. A los matraces 2, 3, 4 y 5 se le añadieron respectivamente 0,1; 0,2;0,4 y 0,5 ml de su preparación de enzima. Exactamente 1 minuto después de agregar la enzima se procedió a agregar 5 ml de H2SO4 2 N para detener la reacción. 

3. Se anotaron los resultados en una tabla.







III. RESULTADOS

Experiencia 1:













Experiencia 2:

Tubo H202 pH 7 0,24% μmoles iniciales de H2O2 Enzima H2SO4 2N KMnO4 gastados μmoles de
H2O2remanentes μmoles de
H2O2 que
reaccionó Velocidad
(μmoles
H2O2/min)
1 5 350 0 5

2 5 350 0,1 5

3 5 350 0,2 5

4 5 350 0,4 5

5 5 350 0,5 5




Experiencia 3:

Matraz ml de
H2O2 pH
7 0,24% μmoles
iniciales
de H2O2 ml de
enzima ml de
H2SO4
2N mL de
KMnO4
gastados μmoles de
H2O2
remanentes μmoles de
H2O2 que
reaccionó Velocidad
(μmoles
H2O2/min)...