pcr aglutinacion en porta

















PCR AGLUTINACIÓN EN PORTA.(AGLUTINACIÓN INDIRECTA)
PRINCIPIO DEL METODO
La PCR-Látex es una técnica de aglutinación en porta para la detección cualitativa y semicuantitativa de PCR en suero humano. Las partículas de látex recubiertas con anticuerpos anti-PCR humana son aglutinadas por moléculas de PCR presentes en la muestra del paciente.

SIGNIFICADOCLINICO
La Proteína C-reactiva es una proteína de fase aguda, presente en el suero de pacientes sanos, la cual puede incrementarse significativamente en la mayoría de procesos infecciosos bacterianos y virales, tejidos dañados, inflamación y neoplasias malignas. El incremento de concentración de esta proteína se produce después de unas horas de desarrollarse la inflamación pudiendo alcanzar nivelesde 300 mg/L en 12-24 horas.

REACTIVOS
Látex  Suspensión de partículas de látex cubiertas de IgG de cabra anti-PCR humana, pH, 8,2. Azida sódica 0,95 g/L.
Control +  Tapón rojo. Suero humano con una concentración de PCR > 20 mg/L. Azida sódica 0,95 g/L.
Control -  Tapón azul. Suero animal. Azida sódica 0,95 g/L.

MUESTRAS
Suero fresco. Estable 8 días a 2-8ºC o 3 meses a-20ºC.
Las muestras con restos de fibrina deben ser centrifugadas antes de la prueba.
No utilizar muestras altamente hemolizadas o lipémicas.

PROCEDIMIENTO
Método cualitativo
1. Atemperar los reactivos y las muestras a temperatura ambiente. La sensibilidad del ensayo disminuye a temperaturas bajas.
2. Depositar 50 µL de la muestra a ensayar y una gota de cada uno de los controlesPositivo y Negativo, sobre círculos distintos de un porta.
3. Homogeneizar suavemente el reactivo de PCR- látex antes de usar. Depositar una gota (50 µL) junto a cada una de las gotas anteriores.
4. Mezclar las gotas con un palillo, procurando extender la mezcla por toda la superficie interior del círculo. Emplear palillos distintos para cada muestra.
5. Situar el porta sobre un agitador rotatorioa 80 – 100 r.p.m. y agitar durante 2 minutos. El exceso de tiempo puede originar la aparición de falsos positivos.

Método semicuantitativo
1. Realizar diluciones dobles de la muestra en solución salina 9 g/L.
2. Proceder para cada dilución, como en la prueba cualitativa.


LECTURA E INTERPRETACION
Examinar macroscópicamente la presencia o ausencia de aglutinación inmediatamentedespués de retirar el porta del agitador. La presencia de aglutinación indica una concentración de PCR igual o superior a 6 mg/L.
En el método semicuantitativo, se define el título como la dilución mayor que da resultado positivo.

CALCULOS
La concentración aproximada de PCR en la muestra del paciente se obtiene aplicando la siguiente fórmula:
6(sensibilidad) x Título de PCR = mg/LDETERMINACION CUALITATIVA SUERO X





Control + suero positivo control –
Aglutina aglutina no aglutina



DETERMINACION SEMICUANTITATIVA SUERO X
½ ½ ½ ½ ½





1/10 1/20 1/40 1/801/160
Aglutina no aglutina
Título: 1/10
Sensibilidad: 6mg/l
Tasa: 6mg/l X 10 = 60 mg/l

ANTIGENOS BACTERIANOS (AGLUTINACIÓN INDIRECTA)

PRINCIPIO DEL METODO
Los Antígenos Bacterianos son una técnica de aglutinación en porta y tubo para la detección y semicuantificación de anticuerpos anti-Salmonella, Brucella y Proteus en suero humano. Los reactivos, suspensionesbacterianas, coloreadas y estandarizadas, aglutinan en presencia del anticuerpo homologo correspondiente en las muestras ensayadas.

SIGNIFICADO CLINICO
El diagnóstico de enfermedades febriles puede establecerse bien sea por el aislamiento del microorganismo en sangre, orina o heces o por la demostración del título de anticuerpos específicos, somáticos (O) y flagelares (H) en el suero del paciente....