PCR en tiempo real



PCR EN TIEMPO REAL

DEFINICION
PCR: Reacción en cadena de la polimerasa, cuyas iniciales en inglés son PCR ("polymerase chain reaction"), es una técnica que fue desarrollada por KaryMullis a mediados de los años 80.
La PCR en tiempo real (o PCR cuantitativa) surgió para resolver el problema de la cuantificación de la técnica de la PCR.
Con esta metodología se pueden producir enel laboratorio múltiples copias de un fragmento de ADN específico, incluso en presencia de millones de otras moléculas de ADN.
Se basa en la actividad de la enzima ADN polimerasa que es capaz defabricar una cadena de ADN complementaria a otra ya existente. Sus únicos requerimientos son que existan adenina, timina, citosina y guanina( nucleótidos) en el medio que son la materia base parafabricar el ADN y una pequeña cadena de ADN que pueda unirse a la molécula que queremos copiar para que sirva como cebadora.

¿COMO SE LLEVA A CABO?

En la PCR en tiempo real se emplean sondas marcadascon fluorocromos. Las sondas de hidrólisis, frecuentemente empleadas en esta técnica, son oligonucleótidos que presentan fluorocromos en ambos extremos y tienen una secuencia complementaria a partedel fragmento de ADN que se quiere amplificar. Uno de los fluorocromos actúa como donador de fluorescencia en el extremo 5’ y el otro como aceptor de esta fluorescencia en el extremo 3’.
La ADNpolimerasa se desplaza sobre la cadena de ADN sintetizando la cadena complementaria a partir de un fragmento de ADN que sirve de molde (cebador). Al llegar al punto en el que la sonda se ha hibridado, lahidroliza. El fluorocromo del extremo 5’ de la sonda (el donador) es liberado.
El fluorocromo aceptor no puede entonces absorber la fluorescencia del donador por estar alejado de él espacialmente. Undetector realiza la medida de esta emisión de fluorescencia, que es proporcional a la cantidad de ADN presente, y la representa gráficamente.

VENTAJAS
Además de proporcionar información...