PCR en tiempo real

• Antecedentes.
Los primeros que sentaron las bases para desarrollar
la PCR en tiempo real fueron Higuchi y
colaboradores, en 1992, al video grabar en tiempo
real laincorporación de bromuro de etidio al ADN
durante cada ciclo de la PCR realizada bajo luz UV.

PCR EN TIEMPO REAL
Objetivo de la PCR en tiempo real ha sido
detectar y cuantificar lassecuencias
específicas de ácidos nucleicos mediante el
uso de reporteros fluorescentes en la
reacción.

PRINCIPIO BASICO DE LA PCR TIEMPO REAL
• El principio de la técnica se basa enla PCR
punto final, sólo que la forma en cómo se
detectan y analizan los productos de la
amplificación es diferente. El término en
tiempo real se refiere a que la detección delos
productos amplificados sucede en cada ciclo
de la reacción.

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INGRDIENTES QUIMICOS:
dNTP’s.
Mg.
Buffer.
Master mix

Los primers deben ser diseñadosespecialmente para garantizar una alta
especifi cidad

METODOS PARA DETECTAR LOS PRODUCTOS
AMPLIFICADOS
No especifico

especifico

Como se captura la señal de fluorescenciaComo se analizan los resultados
• los termocicladores están proveídos de una PC con un
software que generalmente son fáciles de usar. Este software
genera una serie de gráficas endonde se muestran todos los
datos necesarios para conocer si la reacción fue exitosa.

Curva de disociación o curva melting

observación en electroforesis

Conclusión
•Tal fue su impacto de la PCR en la comunidad científica que hoy en día es una
técnica que se usa a diario en muchos laboratorios y que se incrementó cuando
apareció la modalidad dePCR en tiempo real, permitiendo el establecimiento y la
aplicación de nuevos protocolos experimentales más precisos que generan
resultados confiables y reproducibles

.