Pcr examples
Páginas: 4 (900 palabras)
Publicado: 8 de noviembre de 2011
Grupo 1
Ingeniería Genética
Ejercicio 1:
Sea la siguiente secuencia de un gen (414 pb)
ATGAGCTGTATCTAGCCTGCGTTTTCTTCGCGGTTCAGCACCTTGCCGAGCAGGTCGACGCTGGGCGCGGTATTTTTGGCCGGTTCAATTTCAGGATCCACTCATCAGACCCGGGCCTCC
TCGAATATGCTAGCCACCACCAGGGGTGGGTTTAAAGGACTTTCGGGACCCATGGACATT
ATGGATGGGACCTGATGGTGAATGGAGGATGGTACCGGGGTCGAAGCTTAACGAATCTAGAGGTTGTGCTTTGATTTACCATACAACGAATTCTACAAACACCAGCGGGACCTGCAGTGC
GTTCAGTTTGCCGATCACGCCATTTTCCATCAGCGCCGGTTTGGCGCGCAACTGGGCGAT
CATCAGGTCCGGTTTTTTGGCCAGAATACTTTCCGCTTCTGTGGAACGATCTAG
Mediante una búsqueda de sitios de restricción en la secuenciase obtuvo las tablas siguientes:
Enzimas que no cortan la secuencia :
Enzyme | Specificity |
AflII | CTTAAG |
BglII | AGATCT |
BspEI | TCCGGA |
BspHI | TCATGA |
ClaI | ATCGAT | EciI | GGCGGA(N)9NN |
MreI | CGCCGGCG |
NaeI | GCCGGC |
NarI | GGCGCC |
NciI | CCSGG |
PacI | TTAATTAA |
PaeR7I | CTCGAG |
RsaI | GTAC |
SacI | GAGCTC |
SphI |GCATGC |
Enzimas que cortan una vez la secuencia:
Enzyme | Specificity | Sites &
flanks | Cut positions
(blunt - 5' ext. - 3' ext.) |
BamHI | GGATCC | list | 94/98 |
EcoRI |GAATTC | list | 268/272 |
HindIII | AAGCTT | list | 224/228 |
KpnI | GGTACC | list | 215/211 |
NcoI | CCATGG | list | 170/174 |
NheI | GCTAGC | list | 129/133 |
PstI | CTGCAG |list | 296/292 |
SalI | GTCGAC | list | 54/58 |
SmaI | CCCGGG | list | 112 |
StyI | CCWWGG | list | 170/174 |
XbaI | TCTAGA | list | 236/240 |
XmaI | CCCGGG | list | 110/114 |Queremos clonar esta secuencia en el vector pBAD 24 (4.5 kb) siguiente, para realizar una análisis de expresión del gen.
XbaI : 2000
XbaI : 2000
Este vector lleva un promotor (PBAD), rioarriba de un sitio múltiple de clonación (MSC). La función de un MSC es de proveer diferentes sitios de corte por enzimas de restricción que cortan una sola vez en el plásmido, facilitando así la...
Ingeniería Genética
Ejercicio 1:
Sea la siguiente secuencia de un gen (414 pb)
ATGAGCTGTATCTAGCCTGCGTTTTCTTCGCGGTTCAGCACCTTGCCGAGCAGGTCGACGCTGGGCGCGGTATTTTTGGCCGGTTCAATTTCAGGATCCACTCATCAGACCCGGGCCTCC
TCGAATATGCTAGCCACCACCAGGGGTGGGTTTAAAGGACTTTCGGGACCCATGGACATT
ATGGATGGGACCTGATGGTGAATGGAGGATGGTACCGGGGTCGAAGCTTAACGAATCTAGAGGTTGTGCTTTGATTTACCATACAACGAATTCTACAAACACCAGCGGGACCTGCAGTGC
GTTCAGTTTGCCGATCACGCCATTTTCCATCAGCGCCGGTTTGGCGCGCAACTGGGCGAT
CATCAGGTCCGGTTTTTTGGCCAGAATACTTTCCGCTTCTGTGGAACGATCTAG
Mediante una búsqueda de sitios de restricción en la secuenciase obtuvo las tablas siguientes:
Enzimas que no cortan la secuencia :
Enzyme | Specificity |
AflII | CTTAAG |
BglII | AGATCT |
BspEI | TCCGGA |
BspHI | TCATGA |
ClaI | ATCGAT | EciI | GGCGGA(N)9NN |
MreI | CGCCGGCG |
NaeI | GCCGGC |
NarI | GGCGCC |
NciI | CCSGG |
PacI | TTAATTAA |
PaeR7I | CTCGAG |
RsaI | GTAC |
SacI | GAGCTC |
SphI |GCATGC |
Enzimas que cortan una vez la secuencia:
Enzyme | Specificity | Sites &
flanks | Cut positions
(blunt - 5' ext. - 3' ext.) |
BamHI | GGATCC | list | 94/98 |
EcoRI |GAATTC | list | 268/272 |
HindIII | AAGCTT | list | 224/228 |
KpnI | GGTACC | list | 215/211 |
NcoI | CCATGG | list | 170/174 |
NheI | GCTAGC | list | 129/133 |
PstI | CTGCAG |list | 296/292 |
SalI | GTCGAC | list | 54/58 |
SmaI | CCCGGG | list | 112 |
StyI | CCWWGG | list | 170/174 |
XbaI | TCTAGA | list | 236/240 |
XmaI | CCCGGG | list | 110/114 |Queremos clonar esta secuencia en el vector pBAD 24 (4.5 kb) siguiente, para realizar una análisis de expresión del gen.
XbaI : 2000
XbaI : 2000
Este vector lleva un promotor (PBAD), rioarriba de un sitio múltiple de clonación (MSC). La función de un MSC es de proveer diferentes sitios de corte por enzimas de restricción que cortan una sola vez en el plásmido, facilitando así la...
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