PCR introducción

Alumno: Jesús Dávila Ccoyllo
Tema: PCR
Curso: Biología Molecular

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La técnica de PCR es un método de B.M, que es
muy aplicada para amplificar un segmento
especifico de acidonucleico (ADN o ARN), en un
medio in vitro.
Duplicación in vitro de un segmento de genoma
(100-1,000 pb) para hacerlo visible.
Segmento amplificado: AMPLICÓN

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Informaciónde secuencia
Primers (oligonucleótidos: especificidad).
DNA target( plantilla o molde).
Desoxinucleotidos trifosfato: dNTPs
Termociclador: máquina que cambia de temperaturas
cíclicamente paramicrotubos.
Heat-stable DNA polymerase (enzima catalizadora).
Buffer (pH)
MgCl2

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El ciclo en si esta se da mediante 3 etapas que
son:
Denaturación ( 94°c / 30 seg.)
Hibridación (50- 60 °c /60 seg.)
Extensión (72 °c / 15 seg.- 5 minutos)

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Segmento de DNA sintético entre 15 a 30
nucleótidos. Compra por internet. Generalmente 1
cada lado.
Secuenciaespecífica (generalmente única en
genoma)
En concentraciones molares millones de veces
mas que plantilla.
Programas para cálculo de temperatura de
hibridación según tamaño y cantidad de G+C/A+T
Tm= 4(G + C) + 2(A + T)°C

Aproximadamente 5 grados menos que el menor Tm
del par de primers.

Tamaño Tamaño ideal: 20-25 nucleótidos de
longitud ,generalmente: 18-30 nucleótidos de
longitud. Base en el extremo 3' Debe ser una G o una C
 Temperaturas de fusión
 (Tm) 50-65 ºC
 Contenido GC 40-60%
 Auto-complementariedad:
 Debe ser evitada
 Para minimizar la formación deestructuras
secundarias y los dimeros de primer.
 Similaridad Debe tener un 100% de
apareamiento con el molde.
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3´ repetido

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5´

3´
5´

3´

Dímero de primer
5´
3´

3´

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Temperatura de hibridación de primers.
Concentración de Mg2+.
pH
Tiempo de extensión.
Tiempo de denaturación e hibridación.
Cantidad de DNA plantilla, Taq polimerasa,...