PCR Molecular La Buena

Polymerase
Chain Reaction
Biología Molecular
Por:
Gustavo Martínez Barrales
Emmanuel Velázquez Álvarez

Antecedentes

Kary Banks Mullis
O Premio Nobel de Química 1993

Antecedentes

“Mr. Cycles”“DNA Thermal Cycler”

¿Que es la PCR?
O La

reacción en cadena de la
polimerasa es una técnica in vitro
utilizada
para
amplificar
enzimáticamente
una
región
determinada de ADN cuya secuencia
se conoce.¿Qué necesita un PCR?
O DNA Molde. Esto es la muestra de ADN que contiene
la secuencia diana. Al comienzo de la reacción, se aplica
alta temperatura a la molécula de ADN de doble hebra
original, paraseparar las hebras entre sí.

O DNA polimerasa. un tipo de enzima que sintetiza
nuevas hebras de ADN complementarias a la secuencia
diana. La primera y más comúnmente utilizado de estas
enzimas es laADN polimerasa Taq (de Thermis
aquaticus), mientras que el ADN polimerasa Pfu (de
Pyrococcus furiosus) se utiliza ampliamente debido a su
mayor fidelidad al copiar ADN.

O Los

nucleótidosdesoxinucleótidos

(dNTPs o
trifosfato).

Las
unidades individuales de las
bases A, T, G y C, que son
esencialmente
"bloques
de
construcción" para nuevas cadenas
de ADN.

Primers
O Los oligonucleótidosiniciadores o cebadores, son

secuencias cortas de ácidos nucleicos que contiene un
grupo 3'hidroxilo libre que forma pares de bases
complementarios a una hebra molde y actúa como
punto de inicio para laadición de nucleótidos con el
fin de copiar la hebra molde.

Primers
O La posición de los iniciadores debe ser relativa a

los codones de inicio y terminación; es
recomendable que el cebador"forward“( 3´->5
´) y "reverse“ (5´-> 3´) se encuentren mas o
menos a 35 pb del inicio de la secuencia que
codifican
O Los primers deben ser diseñados de modo que

tengan una secuencia única dentro del DNA queserá amplificado.

http://bioinfo.ut.ee/primer3/

Controles
O Hay que comprobar mediante controles la

eficacia de la extracción y amplificación del ADN.
O El control positivo contiene ADN...