PCR MUTAGENESIS
Páginas: 2 (287 palabras)
Publicado: 17 de junio de 2015
PCR
MUTAGENESIS
¿Qué ES MUTAGENIS?
En genética se denomina mutagénesis a la producción de mutaciones
sobre ADN, clonado o no. De realizarse in vitro, dicha alteración puede
realizarseal azar (mutagénesis al azar), sobre cualquier secuencia, o bien
de forma dirigida (mutagénesis dirigida) sobre una secuencia conocida y en
la posición de interés. En el caso de realizarse invivo, sobre organismos y
no sobre ADN clonado por tanto, se realiza a gran escala y sin
conocimiento de secuencia, empleando para ello sustancias denominadas
mutágenos.
MUTAGÉNESIS POR PCRConsiste
en introducir cambios
de secuencia dentro de
fragmentos (clonados) de ADN
Mutagénesis con PCR-extensión
solapada
El
método de extensión solapada requiere:
2 primers mutagénicosy otros 2
Amplifica un fragmento 5´ y un fragmento
3´ que se solapan.
Ambos
Se
portan la mutación.
utilizan los productos en otra reacción
para producir el ADN mutado de longitudcompleta.
Mutagénesis sitio dirigida
La
mutagénesis sitio-dirigida in vitro es una técnica invaluable
para estudiar relaciones de la estructura-función de proteínas,
la expresión del gen yla modificación del vector.
El
uso de PCR en mutagénesis sitio-dirigida logra la separación
de las hebras usando un paso de desnaturalización que separa
las hebras complementarias ypermitiendo la polimerización
eficiente de las primers de PCR. Los métodos de PCR sitiodirigidos permiten así que las mutaciones sitio-específicas
sean incorporadas en cualquier plasmido de doblecadena
El
gen de interés es amplificado con una ADN
polimerasa en condiciones donde la fidelidad
transcripcional es baja y se introducen errores en las
copias generadas. Dado que la mayoríade las
mutaciones no son beneficiosas, dos mutaciones
favorables se acumularán en el mismo gen, solamente
con baja probabilidad y muchas mutaciones
beneficiosas serán enmascaradas
MUTAGENESIS
¿Qué ES MUTAGENIS?
En genética se denomina mutagénesis a la producción de mutaciones
sobre ADN, clonado o no. De realizarse in vitro, dicha alteración puede
realizarseal azar (mutagénesis al azar), sobre cualquier secuencia, o bien
de forma dirigida (mutagénesis dirigida) sobre una secuencia conocida y en
la posición de interés. En el caso de realizarse invivo, sobre organismos y
no sobre ADN clonado por tanto, se realiza a gran escala y sin
conocimiento de secuencia, empleando para ello sustancias denominadas
mutágenos.
MUTAGÉNESIS POR PCRConsiste
en introducir cambios
de secuencia dentro de
fragmentos (clonados) de ADN
Mutagénesis con PCR-extensión
solapada
El
método de extensión solapada requiere:
2 primers mutagénicosy otros 2
Amplifica un fragmento 5´ y un fragmento
3´ que se solapan.
Ambos
Se
portan la mutación.
utilizan los productos en otra reacción
para producir el ADN mutado de longitudcompleta.
Mutagénesis sitio dirigida
La
mutagénesis sitio-dirigida in vitro es una técnica invaluable
para estudiar relaciones de la estructura-función de proteínas,
la expresión del gen yla modificación del vector.
El
uso de PCR en mutagénesis sitio-dirigida logra la separación
de las hebras usando un paso de desnaturalización que separa
las hebras complementarias ypermitiendo la polimerización
eficiente de las primers de PCR. Los métodos de PCR sitiodirigidos permiten así que las mutaciones sitio-específicas
sean incorporadas en cualquier plasmido de doblecadena
El
gen de interés es amplificado con una ADN
polimerasa en condiciones donde la fidelidad
transcripcional es baja y se introducen errores en las
copias generadas. Dado que la mayoríade las
mutaciones no son beneficiosas, dos mutaciones
favorables se acumularán en el mismo gen, solamente
con baja probabilidad y muchas mutaciones
beneficiosas serán enmascaradas
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