Pcr Polymerase Chain Reaction O Reacción En Cadena De La Polimerasa.

PCR Polymerase Chain Reaction o Reacción en Cadena de la Polimerasa.


Objetivo: sintetizar muchas veces un fragmento de ADN

Cuando se realiza una reacción de PCR se simula lo que sucede enuna célula cuando se replica el ADN.
El reactor funciona como una célula:
•ADN polimerasa o mezcla de estas
•ADN del organismo que se estudiará
•Los oligonucleótidos
•Primers, iniciadores,cebadores, “oligos”: secuencias de 6-24 nucleotidos, que permiten que la polimerasa inicie la reacción.
•Dinucleótidos (dNTPs)
•Iones divalentes. Mg2+ (MgCl2), Mn2+. Actúan como cofactores de la polimerasa.•Iones monovalentes K+
•Una solución tampón (buffer)

Fundamento:
Se fundamenta en la DNA polimerasa[pic]
Fundamento:
Las DNA polimerasas replican moléculas de ADN.
Considerando la propiedadde desnaturalización y renaturalización de las moléculas de ácidos nucleicos. La DNA polimerasa puede sintetizar una nueva molécula de ADN mediante ciclos de altas y bajas temperaturas.
La polimerasaes una proteína.
Se desnaturaliza
La desnaturalización del DNA se promueve a altas temperaturas.
Se requirió una DNA polimerasa termoestable.
Fundamento:
Estas ADN polimerasas termoestablesThermus aquaticus (polimerasa Taq)
Pyrococcus furiosus (Pfu)
Thermococcus litoralis (Vent)
Thermus termophilus (Tth)
¿Cómo es que se amplifica los fragmentos?
95°C Desnaturalización
40° y 60°CAlineamiento. A esta temperatura se forman y se rompen constantemente los puentes de hidrógeno entre los oligonucleótidos y el ADN, y aquellas uniones más estables (las que son complementarias) duraránmayor tiempo, quedando los oligonucleótidos “alineados” formando una pequeña región de doble cadena.
¿Cómo es que se amplifica el (o los) fragmento(s)?
La polimerasa se une a este pequeño pedazo deADN de doble cadena y comienza a copiar en sentido 5’ a 3’.
Al agregar unas bases más, los puentes de hidrógeno que se forman entre las bases estabilizan más la unión y el oligonucleótido permanece...