PCR (Polymerase Chain Reaction)

PCR (Polymerase Chain Reaction)
La reacción en cadena de la polimerasa (PCR por sus siglas en inglés) es una técnica in vitro utilizada para amplificar enzimáticamente una región determinada de ADNsituada entre dos regiones de ADN cuya secuencia se conoce hasta un millón de veces en unas cuantas horas. Para esto es necesario tener un ejemplar intacto del ADN que se desea amplificar. Aunque lasmuestras no tienen que estar muy purificadas, sí es necesario eliminar algunos contaminantes, como la heparina, el formol, los agentes quelantes de Mg2+ o los detergentes, para evitar que inhiban elproceso de amplificación.

Las técnicas de PCR se han hecho indispensables para muchos procedimientos comunes, como la clonación de fragmentos específicos de ADN, la detección e identificación degenes para diagnóstico y medicina legal, y en la investigación de modelos de expresión de los genes. Más recientemente, la PCR ha permitido la investigación de nuevos campos, como el control de laautenticidad de los alimentos, la presencia de ADN modificado genéticamente y la contaminación microbiológica. También ha hecho posible la comparación de ADN de diferentes especies para la creación deárboles filogenéticos.
El PCR se basa en la replicación semiconservativa por complementariedad del ADN en la cual el ADN de doble cadena se separa por desnaturalización a altas temperaturas y el ADN deuna sola cadena se duplica por medio de la acción de la enzima Taq Polimerasa (una polimerasa termoestable aislada de la bacteria Thermus aquaticus , actúa a una velocidad de 35 – 100nucleótidos/segundo. ), la cual cataliza el enlace fosfodiester entre dos nucleótidos. Por lo tanto esta técnica consiste en ciclos repetitivos de:
• Desnaturalización del ADN por fusión a temperatura elevada, afin de convertir el ADN bicatenario en ADN monocatenario. Para obtener la desnaturalización del ADN, la temperatura suele aumentarse hasta unos 93 - 96°C, para romper los puentes de hidrógeno entre...