pcr real

La cuantificación de maíz Bt-176 secuencias genómicas por superficie
Análisis de Interacción bioespecífica basado en resonancia de plasmón de
Reacción Multiplex cadena de polimerasa (PCR)
Resonancia de plasmón superficial (SPR) biosensores basados ​​han sido descritos para la identificación de organismos modificados genéticamente (OMG) por análisis de la interacción bioespecífica (BIA). En estetrabajo se describe el diseño y ensayo de un protocolo basado BIA-SPR para las determinaciones cuantitativas de OMG. Reacción en cadena de la polimerasa múltiplex biotinilado (PCR) los productos de maíz no transgénico, así como polvos de maíz que contienen 0,5 y el 2% se inmovilizaron modificados genéticamente Bt-176 secuencias en diferentes celdas de flujo de un chip sensor. Después de lainmovilización, las diferentes sondas de oligonucleótidos reconociendo.
Se inyectaron zeína de maíz Bt-176 y secuencias. Los resultados obtenidos se compararon con Southern
El análisis de transferencia y con ensayos cuantitativos PCR en tiempo real. Se demostró que las inyecciones secuenciales de Bt-176 y sondas zein al sensor células de flujo de chips que contienen productos de PCR multiplex permitendiscriminación entre PCR realizada utilizando maíz ADN genómico que contiene 0,5% Bt-176 secuencias y que lleva a cabo usando ADN genómico de maíz que contiene 2% Bt-176 secuencias. La eficiencia de SPR-BIA basado en material que contiene diferentes cantidades de maíz Bt-176 discriminar es comparable a-PCR cuantitativa en tiempo real y mucho más fiable que la transferencia Southern, que en elpasado ha utilizado para los propósitos semicuantitativos. Además, el enfoque permite el ensayo de BIA para ser repetido varias veces en el mismo producto de la PCR multiplex inmovilizado en el chip sensor, después de lavado y regeneración de la célula de flujo. Por último, se destaca que la estrategia presentada al cuantificar los OGM podrían ser propuestos para todos los basados ​​en SPR,biosensores disponibles en el mercado. Algunos de estos biosensores basados ​​en SPR ópticos utilizar, en lugar de chips sensores basados ​​en el flujo, se agitó microcubetas, la reducción de los costos de la experimentación.
PALABRAS CLAVE: Reacción en Cadena de la Polimerasa; OGM; biosensores; ensayos en tiempo real; plasmón superficial de resonancia; PCR multiplex; maíz Bt-176.
INTRODUCCIÓN
La ampliaintroducción de organismos genéticamente modificados (OGM) en la agricultura y el creciente número de GMOderived productos lanzados recientemente en el mercado de alimentos (1-6) han llevado a una fuerte demanda por los clientes por regulaciones estrictas y el etiquetado de dichos productos (5). En consecuencia, la identificación y la cuantificación de los OGM se están convirtiendo en temas de graninterés y, aunque varios métodos para la detección de OGM han sido recientemente desarrollado (7-12), los enfoques para la cuantificación de OMG todavía se basan en gran medida en cadena de polimerasa cuantitativa
Reacción (PCR) (13-20). De hecho, la PCR cuantitativa en tiempo real enfoques han sido desarrollados recientemente por varios laboratorios y se aplica a GMO cuantificación, ya que en lamayoría de los países el contenido de un determinado OMG es un parámetro muy importante (4-6). En este sentido, cabe destacar que de hecho Se necesitan métodos de detección cuantitativos para la aplicación del umbral de etiquetado de reciente introducción de los OMG en los alimentos Ingredientes (2-5). Por ejemplo, este umbral se establece en el etiquetado 1% en la Unión Europea y Suiza, y sedebe aplicar a todos los OMG aprobados (2).
En lo que se refiere a la identificación de secuencias de OMG, el reciente desarrollo de resonancia de plasmón superficial (SPR) biosensores basados (21-23) permite a uno realizar bioespecífica análisis de la interacción (BIA) para el seguimiento de una variedad de molecular reacciones en tiempo real. Esta técnica óptica detecta y cuantifica los cambios...