Pcr Tiempo Real

RESUMEN
El objetivo del estudio es determinar la presencia de Salmonella spp mediante la técnica de PCR en tiempo real y el método convencional en canales de bovinos y en alimentos de la vía públicade Montería, Córdoba.
Países como Estados Unidos, Canadá y Colombia, tienen establecido dentro de su legislación “cero tolerancia” para este patógeno. Es por esto, que es necesario implementartécnicas rápidas y muy sensibles en el control de la industria, antes de la liberación de los alimentos al mercado. La implementación de los métodos moleculares es necesaria, ya que las técnicasmicrobiológicas convencionales toman de 4 a 6 días para la detección y la identificación de Salmonella spp.
La técnica PCR-TR (real time PCR), es un método alternativo que proporciona ventajas en cuanto aeficiencia, sensibilidad y disminución del tiempo de detección y que por estar basado en la determinación de ácidos nucleicos, tiene la potencialidad de ser muy específico. Esta técnica molecular se basaen la amplificación in vitro del ADN y a diferencia de reacción en cadena de la polimerasa (PCR) tiene la ventaja de que lleva a cabo simultáneamente los procesos de amplificación y detección en elmismo vial y que determina la cantidad de ADN sintetizado en cada momento de la reacción.
Los alimentos analizados en este estudio fueron canales de bovinos y productos elaborados a base de carne deres, cerdo y queso. Se analizaron 311 muestras, de las cuales, 256 pertenecían a alimentos de la vía pública y 55 a canales de bovino.
El aislamiento y la identificación de Salmonela spp se hicieronsegún los protocolos convencionales. Las colonias sospechosas se identificaron con pruebas bioquímicas convencionales y pruebas serológicas bajo el esquema rutinario de Kauffman-White. La técnica de PCRen tiempo real se llevó a cabo según el protocolo LightCycler® foodproof Salmonella detection kit, el cual consistió en 47 ciclos compuestos por tres pasos, desnaturalización (95 ºC por 2...