Peroxidasa Y Polifenol Oxidasa
DEPARTAMENTO DE CIENCIAS QUÍMICO BIOLÓGICAS
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Laboratorio de bioquímica II
Maestro: Rafael Canett Romero
Practica # 3
Peroxidasa y polifenol oxidasa
Integrantes:
Nataly Ruvalcaba Garfias
Christian Torres Virgen
Ilse Vázquez
Hermosillo, Sonora martes, 06 de marzo de 2012
INTRODUCCIÓNPeroxidasa
La peroxidasa es una homoproteina altamente específica para el aceptor de hidrogeno, que es el peróxido de hidrogeno, pero es muy inespecífica en cuanto al sustrato donador que utiliza, pueden ser fenoles, aminofenoles, diaminas, indofenoles, entre otros.
La reacción de la peroxidasa es la siguiente:
Donador reducido + H2O2 -----------> donador oxidado + 2 H2O
La enzima seencuentra principalmente en la mayoría de las plantas y en algunos microorganismos, pero es muy escasa en los tejidos animales. La actividad de la peroxidasa se observa en la leche, en los leucocitos y en la placenta.
El mecanismo de la peroxidasa es a través de la formación de varios complejos que se forman entre la enzima y el peróxido de hidrogeno antes de que sea capaz de reaccionar con el donadorreducido.
La peroxidasa se puede obtener del rábano con un peso molecular de 40 000, y también de la leche solo que el peso molecular es de 80 000.
Polifenol oxidasa
La polifenol oxidasa recibe muchos nombres debido a la gran diversidad de substractos que emplea. La reacción se describe de la siguiente manera:
2 o-difenol + O2 -------> o-quinona + 2H2O
Esta enzima puede llevar acabo la oxidación directa aerobia de compuestos mono y difenoles. Es una enzima de peso molecular de 120 000 con un centro de cobre.
La polifenol oxidasa de la papa ataca a los siguientes compuestos en orden de mayor a menor actividad: acido clorogenico, catecol, quercitina, pirogalol, acido cafeico, 3,4-dihidroxifenilalanina para dar compuestos finales que son muy complejos y son complejos.Esta es una de las enzimas responsables del oscurecimiento de ciertos alimentos como la papa, la manzana, el aguacate, etc., al contacto con el oxigeno atmosférico. En el caso de la tirosina como substracto, el compuesto resultante es la melanina o pigmento oscuro de la piel y el cabello.
Es difícil distinguir entre las actividades de las dos enzimas a partir de la misma fuente, ya que ambaspueden atacar a los mismos substractos. Pero en este caso se usa la papa y la actividad de la peroxidasa es la más rápida.
OBJETIVO
Observar y comprobar la actividad e inhibición de peroxidasa y polifenol oxidasa, utilizando como fuente de las enzimas un extracto de papa.
MATERIALES Y MÉTODOS
Método
El primer paso consistió en lavar y pelar la papa rápidamente. Se corto en pedazospequeños y se agrego a un vaso de precipitados que contiene 100 mL de agua destilada que se enfrió previamente en un baño de hielo, esto es para que no se oxide la papa y dejar reposar por 10 minutos.
Al pasar los 10 minutos se filtro la mezcla a través de un pañuelo, a un vaso de precipitados que este sumergido en el hielo. Después de filtrar se desecho la pulpa de la papa. El filtrado de dejoreposar por 5 minutos para que se asiente el almidón en el fondo. Después se decanto el líquido para desechar el almidón. Lo que se obtuvo se llama extracto de papa.
En la gradilla se prepararon 13 tubos numerados del 1 al 13
• En los tubos 1,2,3,4 y 11 se pipeteo catecol
• En los tubos 5,6,7,8 y 12 se pipeteo pirogalol
• A los tubos 9 y 10 se pipeteo tirosina
• En lostubos 2, 4, 6, 8, 10, 11 y 12 se pipeteo peróxido de hidrogeno
• En dos tubos de ensaye aparte se pipeteo 5 mL del extracto y se calentó por 5 minutos. Después se agrego a los tubos 3 y 4 y se dejaron enfriar.
• A los tubos 11 y 12 se les agrego 5 mL de agua destilada
• Al final se agrega a las tubos 1, 2, 5, 6, 7, 8, 9, 10 y 13 5 mL del extracto de papa y se observa el...
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