Pigmentación de cloroplastos por método de cromatografía









UNIVERSIDAD NACIONAL DE SAN AGUSTÍN

FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS Y AGROPECUARIAS

ESCUELA PROFESIONAL Y ACADÉMICA DE AGRONOMÍA




INFORME EXPERIMENTAL
“Practica N°15”

Estudiante:
ELEODORO CHATA PAREDES

Grupo de prácticas:
Lunes de 12-14 horas






Arequipa, 30 de octubre de 2013
Pigmentación de cloroplastos por método de cromatografía


I.INTRODUCCIÓN:

La cromatografía es una técnica que permite la separación de los Componentes de una mezcla debido a la influencia de dos efectos contrapuestos. La cromatografía en papel se utiliza para compuestos muy polares o poli funcionales. El uso más común es para azúcares, aminoácidos y pigmentos naturales. En esta cromatografía se utiliza el fenómeno de partición en donde la fase estacionariase halla sobre un soporte activo (el papel) que en realidad forma parte de la fase estacionaria que es el agua. Las fases móvil y estacionaria estarán en contacto en una gran interface, lo que permite una rápida obtención de una distribución de equilibrio del soluto entre ellas. Si la muestra problema está formada por más de un soluto, éstos se separan por sus diferentes coeficientes de partición.Este informe tiene como uno de sus objetivos identificar los distintos tipos de pigmentos foliares que intervienen en la fotosíntesis, ya que es la estructura química de estos pigmentos la que les da una gama de colores. Así la clorofila a es verde azulado, la clorofila b, es verde amarillento, las xantofilas son amarillas y los carotinoides anaranjados, y además cada pigmento tiene diferenteafinidad con el agua y con solventes orgánicos.



II. OBJETIVOS

Conocer el método de cromatografía en papel.
Identificar que pigmento(s) se encuentran en mayor cantidad en la hoja.

III. REVICION BIBLIOGRAFICA:

Siembra:
Se aplican muestras en solución a no menos de 1,5 cm del borde inferior de una tira rectangular de papel, y a no menos de 1,5 cm de los bordes laterales,manteniendo a su vez, entre mancha y mancha una distancia no menor de 1 cm. Se hace un toque, se evapora el solvente, se hace otro toque, tratando de concentrar la muestra sin superar un diámetro de la mancha de 3 mm. La siembra es puntual para fines analíticos, y en banda para fines preparativos. [1] [2] [3]

Desarrollo:
Ascendente: el solvente se coloca en el fondo de la cuba y el papel se suspendecolocado en la
parte superior de la cuba. Descendente: el solvente se coloca en un depósito inerte ubicado en la parte superior de la cuba cromatografía. En el fondo de la cuba se coloca también un poco de solvente para asegurar la saturación con el vapor. La parte superior del papel se sumerge en el disolvente y se tapa herméticamente la cuba (al igual que en la técnica ascendente). La siembraquedará en la parte superior del papel. Bidimensional: se corre el papel en una dirección y luego del desarrollo y secado se gira 90° y se corre con otro solvente. [2] [3]

Revelado:
Si los compuestos de la mezcla son coloreados, las manchas son visibles directamente. De lo
contrario habrá que revelarlas. Luz UV: si los compuestos absorben esta radiación las manchas se verán confluorescencia. Reactivos de color: especiales para cada compuesto. Se deberá tener en cuenta que no se pueden usar reveladores que destruyan el papel como el ácido sulfúrico o el calor. Vapores de yodo sublimado: es un revelador universal. [1] [2]

Evaluación:
Se efectúa el cálculo del Rf para cada componente de la mezcla por separado, que es característico de cada compuesto en condiciones constantes:soporte, temperatura, solventes, altura de desarrollo. [1]

Cromatografía en papel
Es una técnica que se utiliza para separar pigmentos fotosintéticos, esta técnica ha revolucionado la separación o la detección de productos de reacción, la determinación e identificación de compuestos, fue desarrollada por A.J.P. Martin en Inglaterra en 1994. Este método consiste en cortar tiras de papel...