Plantibodies

Clonación del Gen de la Subunidad B Ureasa de Helicobacter pylori
en Vector Lanzadera y su Expresión en Plantas de Tabaco
(Nicotiana tabacum L.)



RESUMEN



Helicobacter pylori se ha reconocido como un agente etiológico de gastritis crónica, contribuidor a ulceración péptica y factor de riesgo para cáncer gástrico. La infección producida por esta bacteria tiene una gran prevalencia anivel mundial en humanos. La vacunación es el método más efectivo para su prevención y cura. El uso de plantas transgénicas como fábricas para la producción de antígenos es de gran interés biotecnológico puesto que el costo de producción es eficiente. En el presente estudio se tiene como objetivo clonar el gen antígeno ureB a partir de la cepa Y06 de H pylori en el vector lanzadera pBID4, en elcual se incluirá el gen ureB, el gen GUS y la proteína de fusión LicKM para la transformación del disco foliar de plantas de tabaco por medio de vacuna de infiltración. Las plantas de tabaco regeneradas se identificarán por PCR y Southern blot. La expresión del gen ureB en las plantas se confirmará por Western blot y ensayo de inmunodifusión usando antisuero de conejo. Se realizará un ELISA para ladetección de anticuerpos contra rUreB en el suero de personas infectadas y expresión en aislados de H pylori. Este estudio sugiere un avance en la producción de vacunas y pruebas de diagnóstico para la infección por H pylori en humanos.




INTRODUCCIÓN




Helicobacter pylori es una bacteria de forma espiral, microaerofílica, gram-negativa, que tiene una predilección natural por elepitelio gástrico de los humanos (Hu & Mobley, 1990; Labigne, Cussac & Courcoux, 1991; Hu, Foxall, Rusell & Mobley, 1992; Blaser & Parsonnet, 1994; Tomb et al. 1997; Fan et al. 2000; Montecucco & Rappuoli, 2001; Mao & Yan, 2004), un nicho ecológico único caracterizado por un pH muy ácido, condición letal para la mayoría de los microbios. H. pylori está tan bien adaptada a este ambiente hostil que,después de su primera infección, la cual usualmente ocurre en etapas tempranas de la vida, establece una infección crónica toda la vida (Montecucco & Rappuoli, 2001).

La selección de un nicho sin competencia y la habilidad para establecer una infección crónica hacen de H. pylori una de las más exitosas bacterias parásitas en humanos, la cual coloniza más de la mitad de la población humana.(Dubois, Lee, Fiala, Kleanthous, Mehlman & Monath, 1998; Montecucco & Rappuoli, 2001; Xu, Li, Du, Gong, Yang & Jin, 2007). La infección por H. pylori, es más prevalente en países en desarrollo y en personas con desventaja económica en países desarrollados. (Evans, Karjalainen, Evans, Graham & Lee, 1993).

Desde su descubrimiento por Warren y Marshall en 1983 (Cussac, Ferrero & Labigne, 1992) y suexitoso aislamiento por Marshall et al (1984), investigaciones clínicas y bacteriológicas habían sido dirigidas en todo el mundo en un intento para determinar el papel de la bacteria como un agente causal en enfermedades gastroduodenales (Labigne, Cussac & Courcox, 1991). H. pylori es ahora reconocida como el agente etiológico de gastritis antral crónica y contribuidor a ulceración péptica (Labigne,Cussac & Courcoux, 1991; Cussac, Ferrero & Labigne, 1992; Foxall, Rusell & Mobley, 1992; Evans, Karjalainen, Evans, Graham & Lee, 1993); adicional a ello es un factor de riesgo para el desarrollo de carcinoma gástrico (Dubois, Lee, Fiala, Kleanthous, Mehlman & Monath, 1998; Fan et al, 2000; Xu, Li, Du, Gong, Yang & Jin, 2007; Shin, Yang, Nam, Kim, Myung, Bang & Roe, 2002; Yang & Jin, 2007).

Estabacteria ha adoptado una estrategia de supervivencia en la mucosa gástrica humana que incluye la producción de una ureasa citosólica; ésta enzima contiene N2+ hidroliza urea, liberando CO2 y amonio, el cual le permite sobrevivir a un bajo pH a la vez que provoca daño histológico (Hu, Foxall, Russell & Mobley, 1992); por lo cual la ureasa es esencial para la colonización de la mucosa gástrica (Hu...